旋毛蟲43ku ES抗原基因與保姆細(xì)胞形成相關(guān)性的研究.pdf

1、旋毛蟲是一種骨骼肌細(xì)胞內(nèi)寄生的線蟲，被感染的肌細(xì)胞會(huì)失去原有的組織特征，并轉(zhuǎn)變成一種新的組織結(jié)構(gòu)——保姆細(xì)胞（Nurse Cells，NC），旋毛蟲的排泄分泌（ES）蛋白被認(rèn)為參與了保姆細(xì)胞的形成過程，旋毛蟲43ku ES抗原就是其中之一。
　　 本研究旨在利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)建立旋毛蟲43ku ES抗原基因（Ts43）和小鼠骨骼肌細(xì)胞調(diào)節(jié)因子MyoD、Id1基因表達(dá)量的測定方法。并用相應(yīng)方法檢測這些基因的表達(dá)動(dòng)態(tài)，為深入

2、探討Ts43基因的表達(dá)水平與保姆細(xì)胞形成的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　 根據(jù)GenBank中發(fā)表的旋毛蟲的Ts43和18S rRNA基因序列，設(shè)計(jì)引物和探針。以管家基因18S rRNA為內(nèi)參基因，對旋毛蟲總RNA進(jìn)行歸一化處理，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算出Ts43基因的表達(dá)量。應(yīng)用該方法檢測旋毛蟲不同寄生時(shí)期（包括成蟲、新生蚴、成囊前期幼蟲和肌幼蟲）Ts43基因的表達(dá)動(dòng)態(tài)變化。研究結(jié)果表明，旋毛蟲在各寄生時(shí)期均有Ts43基因的表達(dá)，然而成蟲和新

3、生蚴Ts43基因的表達(dá)水平相對于其它寄生時(shí)期的蟲體很低，該基因表達(dá)量在感染后18d開始逐漸上升，于感染后30d達(dá)到高峰，而后開始逐漸下降，但至感染后58d的蟲體Ts43基因表達(dá)水平仍高于成蟲和新生蚴。
　　 根據(jù)GenBank中發(fā)表的小鼠骨骼肌細(xì)胞調(diào)節(jié)因子MyoD、Id1和G3PDH基因序列，設(shè)計(jì)引物。以管家基因G3PDH為內(nèi)參基因，對旋毛蟲總RNA進(jìn)行歸一化處理，利用△Ct值法計(jì)算出MyoD和Id1基因的表達(dá)量。應(yīng)用該方法檢測

4、旋毛蟲不同寄生時(shí)期（感染后7d、14d、18d、22d、26d、30d、34d、38d、48d和58d）和小鼠活體轉(zhuǎn)染Ts43基因前后小鼠骨骼肌細(xì)胞MyoD、Id1基因的表達(dá)動(dòng)態(tài)變化。研究結(jié)果表明，小鼠骨骼肌細(xì)胞MyoD、Id1基因在開始感染旋毛蟲后，基因表達(dá)量持續(xù)增加。MyoD基因表達(dá)量在感染后26d達(dá)到最高值，而Id1基因表達(dá)量在感染后22d達(dá)到最高值。之后，MyoD基因表達(dá)量持續(xù)下降，在感染后38d回到正常水平，而Id1基因表達(dá)量

5、在達(dá)到最高值后迅速下降，在感染后26d時(shí)就回到正常水平。小鼠活體轉(zhuǎn)染Ts43基因后會(huì)使MyoD和Id1基因的表達(dá)量均有增加，但增加的時(shí)間不同，MyoD基因在轉(zhuǎn)染后2d表達(dá)量顯著增加，而Id1基因在轉(zhuǎn)染后6d時(shí)才有顯著增加。保姆細(xì)胞的形成涉及到肌細(xì)胞去分化和再分化，而MyoD和Id1基因都是重要的肌細(xì)胞調(diào)節(jié)因子。本研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠感染旋毛蟲以后，小鼠骨骼肌細(xì)胞MyoD和Id1基因的表達(dá)量都發(fā)生了明顯的變化。說明MyoD和Id1基因很可能在