旋毛蟲P53ES基因重組蛋白單克隆抗體的制備和鑒定.pdf

1、旋毛蟲病是由旋毛形線蟲（Trichinella spiralis）引起的一種人獸共患寄生蟲病，主要寄生于豬、野豬、鼠、熊等150多種動(dòng)物及人體。人體主要因生食或半生食含有旋毛蟲肌幼蟲囊包的豬肉或其他動(dòng)物肉類而感染。由于其病原傳播的復(fù)雜性，以致該病發(fā)現(xiàn)一百多年來，不僅沒有得到完全有效的控制，而且發(fā)生范圍反而逐漸擴(kuò)大。要迅速、有效地控制和預(yù)防旋毛蟲病的流行，必須有快速準(zhǔn)確的檢測技術(shù)。本研究選用旋毛蟲P53ES基因重組蛋白免疫小鼠制備McAb

2、，為進(jìn)一步研制旋毛蟲病診斷試劑盒提供理想、必備的試驗(yàn)材料。
　　 以旋毛蟲P53ES基因的重組蛋白免疫BALB/c鼠，取小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合，經(jīng)間接ELISA篩選和有限稀釋法克隆，篩選分泌高滴度McAb雜交瘤細(xì)胞株，制備腹水。
　　 Southern Biotechnology Associates，Inc的SBA ClonotypingTMSystem/AP對單克隆抗體進(jìn)行亞類鑒定；采用ELISA間接法

3、測定雜交瘤細(xì)胞上清液和小鼠腹水效價(jià)；Western-blot檢測單克隆抗體的特異性；測定雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的穩(wěn)定性；間接ELISA檢測單克隆抗體與隱孢子蟲、豬鞭蟲、豬囊尾蚴囊液抗原、多頭蚴囊液、日本血吸蟲抗原是否存在交叉反應(yīng)；間接免疫熒光方法檢測單克隆抗體與肌幼蟲的免疫學(xué)反應(yīng)。結(jié)果表明：得到兩株能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為2H5和3D2；試劑盒鑒定兩株McAb均屬IgM亞類，其輕鏈均為κ鏈；腹水效價(jià)分別為1：24000