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文檔簡介
1、旋毛蟲病是一種嚴重的人獸共患寄生蟲病,其分布幾乎遍及全球各地。該病不僅嚴重危害人體健康,而且還給畜牧業(yè)及食品工業(yè)帶來重大的經(jīng)濟損失,所以及時準(zhǔn)確的診斷并治療旋毛蟲病顯得至關(guān)重要。 鑒于旋毛蟲病的危害性,研制敏感性高、特異性強的旋毛蟲病診斷試劑和保護性高的基因工程抗體,對于防治旋毛蟲病有重要的實際意義。本研究選用pET-30a表達載體表達本地毛形線蟲49ku ES抗原,利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體,為建立檢測旋毛蟲循環(huán)抗原方法和旋
2、毛蟲病早期診斷試劑盒及基因工程抗體的研制提供理想、必備的試驗材料。 利用本地毛形線蟲49ku ES重組蛋白免疫Balb/C小鼠,取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合,篩選分泌高滴度McAb雜交瘤細胞株,制備腹水進行純化。采用間接ELISA方法測定雜交瘤細胞上清液和小鼠腹水效價;用Southern Biotechnology Associates,Inc的SBA Clonotyping<'TM>System/AP對單克隆抗體進行亞類鑒定;
3、Dot-ELISA和Western blot試驗檢測單克隆抗體的特異性;間接ELISA方法檢測單克隆抗體與日本血吸蟲成蟲抗原、豬囊尾蚴囊液抗原、豬蛔蟲抗原、豬鞭蟲抗原是否存在交叉反應(yīng)。結(jié)果表明:獲得兩株抗ES49ku ES重組蛋白雜交瘤細胞株,分別命名為D5和C1;兩株雜交瘤細胞上清液和腹水效價均達到1∶1280和1∶12800;均能穩(wěn)定分泌敏感性強高、特異性強高的IgM類McAb,輕鏈為к鏈;兩株單克隆抗體均能特異性識別約49ku處的
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