豬圓環(huán)病毒Ⅱ型Cap蛋白單克隆抗體的制備和鑒定.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus)屬于圓環(huán)病毒科，圓環(huán)病毒屬，它有兩個血清型：PCV1和PCV2。PCV1廣泛存在于豬體內和豬源傳代細胞系，無致病性；PCV2不僅可以感染豬引起原發(fā)性的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PWMS)，還可以侵害豬的免疫系統(tǒng)，引發(fā)仔豬A2型先天性震顫(CT)、成年豬皮炎腎炎綜合征(PDNS)和呼吸道疾病綜合(PRDS)，對世界養(yǎng)豬業(yè)危害嚴重，因而世界各國都非常重視對PCV2的研究。PCV2有兩個主要的

2、閱讀框ORF1和ORF2。其中ORF2編碼的Cap蛋白是病毒的主要結構蛋白，具有型特異性，因此，豬圓環(huán)病毒Ⅱ型Cap蛋白單克隆抗體對PCV2的鑒別診斷有重要意義。本實驗的目的就在于用原核表達的純化復性后的PCV2-Cap融合蛋白免疫小鼠，制備針對Cap蛋白的穩(wěn)定的、高特異的單克隆抗體。試驗結果如下： 1.將已經構建好的原核表達載體在大腸桿菌中進行表達，對表達產物進行了SDS-PAGE分析，結果表明該重組蛋白大小約為45ku，與預

3、期結果一致。利用His-bind親和層析純化表達的重組蛋白，經紫外線吸收法檢測表明，重組蛋白的濃度約為5mg/mL。 2.用純化的重組蛋白免疫小鼠，取其脾臟細胞與骨髓瘤細胞SP2/0進行融合，經間接ELISA篩選及連續(xù)3次亞克隆，獲得了三株能穩(wěn)定分泌抗PCV2-Cap蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞：1C7A4，4F3F5和4G8F7。雜交瘤細胞株經凍存、復蘇及連續(xù)傳代后仍能穩(wěn)定分泌單抗，細胞染色體數(shù)目均在98～103之間。