抗豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的單克隆抗體制備及鑒定.pdf

1、豬流行性腹瀉病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)是引起豬流行性腹瀉(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)的病原體，在臨床上主要表現(xiàn)為豬的水樣腹瀉、嘔吐、脫水。該病傳播迅速，發(fā)病率高，而且對哺乳仔豬致死率高，給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
　　纖突蛋白（Spike，S）是PEDV的一個重要結(jié)構(gòu)蛋白及表面抗原，可以人為地劃分為S1和S2蛋白，其中S1蛋白在識別宿主

2、細(xì)胞上的入胞受體，促進(jìn)病毒囊膜與細(xì)胞膜的融合，介導(dǎo)病毒的入侵過程中扮演著重要的角色，且含有主要的中和抗原表位。本研究采用RT-PCR的方法從江蘇東臺市某豬場的病料中克隆了PEDV S1基因部分區(qū)域(1318-2343 nt)，并將其分別構(gòu)建到pET-28a、pET-32a以及pGEX-4T-1這三個原核表達(dá)載體上，采用1 mM IPTG誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)重組蛋白在表達(dá)宿主菌E.coli BL21(DE3)中表達(dá)。結(jié)果顯示3個重組載體均能夠表達(dá)目

3、的蛋白，但是表達(dá)量均不是很高，綜合各種因素，最后選取pET-28a-PEDV-rS1這個重組載體進(jìn)行目的蛋白的大量誘導(dǎo)表達(dá)，并利用尿素變性純化目的蛋白，并驗證獲得的蛋白與His鼠單抗的反應(yīng)性。
　　以純化的PEDV-rS1重組蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠，并利用細(xì)胞融合以及有限稀釋的方法篩選陽性雜交瘤細(xì)胞株，最終獲得3株抗PEDV-rS1蛋白的特異性單克隆抗體，分別命名為2F4、3E5、4G11。單克隆抗體亞型鑒定顯示，2F4的