旋毛蟲感染及其ES抗原對小鼠NOD1受體通路影響研究.pdf

1、旋毛蟲病是由旋毛蟲感染宿主引起的一種嚴重的寄生蟲病。這種感染大多數(shù)情況下是食源性的。宿主被旋毛蟲感染的過程中蟲體可產(chǎn)生各類抗原與宿主免疫系統(tǒng)相互作用，從而危害宿主健康。天然免疫系統(tǒng)能在第一時間發(fā)現(xiàn)識別并抵抗病原體的入侵。NOD1受體是一種關鍵的天然免疫受體，在許多細胞和組織中均存在。一般NOD1受體被病原體激活后可活化下游的效應分子RIP2，它的能夠引起caspase-1、NF-κB、MAPKs等信號路徑被激活，誘導TNF-α、 IL-

2、1β和IL-6等炎性因子分泌，進而引起多種免疫應答反應。研究表明，NOD1受體與許多種病原體感染引起的免疫應答相關，如細菌、真菌、病毒、寄生蟲等。而在旋毛蟲感染中關于NOD1受體的研究未見報道。所以，本研究應用熒光定量PCR、Western blot、ELISA等實驗方法來著重研究旋毛蟲感染對宿主NOD1受體通路的影響，從而探討旋毛蟲感染與宿主免疫系統(tǒng)之間互相作用的機制。
　　依據(jù)GenBank中登錄的小鼠NOD1、RIP2、NF

3、-κB和GAPDH序列，設計并合成引物，建立以上基因的熒光定量PCR檢測方法。在旋毛蟲感染小鼠后0.5d、4d、7d、14d、21d、28d、35d應用熒光定量PCR檢測其腹腔巨噬細胞及小腸、心臟、肺臟、肌肉組織中NOD1、RIP2和NF-κB mRNA表達水平。應用Western blot對腹腔巨噬細胞中NOD1、RIP2、NF-κB p65、NF-κB p-p65進行檢測。應用ELISA測定小鼠腹腔巨噬細胞培養(yǎng)上清和血清中TNF-α

4、、IL-1β和IL-6含量。
　　熒光定量PCR結果表明，旋毛蟲感染小鼠后小鼠腹腔巨噬細胞中各目的基因表達量均呈現(xiàn)雙峰的趨勢，其中NOD1、RIP2和NF-κB mRNA在感染后0.5d和21d、4d和21d、0.5d和21d先后呈現(xiàn)兩個峰值。在小腸和心臟中，感染不同時期各目的基因表達量都有升高，分別于感染后4d和14d達到峰值。在肺臟中，NOD1 mRNA表達量僅在感染后7d略增多，而RIP2的mRNA表達量在各個感染期均呈現(xiàn)上

5、升趨勢，并于感染后4d到達峰值。在肌肉中，各目的基因在感染初期變化不明顯，而于感染后21d顯著升高，28d到達峰值。Western blot結果表明，在旋毛蟲感染小鼠后小鼠腹腔巨噬細胞中NOD1、RIP2和NF-κB p-p65表達量均有不同程度的升高，其變化趨勢與熒光定量PCR結果相似。ELISA結果顯示，感染旋毛蟲小鼠腹腔巨噬細胞培養(yǎng)上清和小鼠血清中TNF-α、IL-6的含量均顯著升高，而IL-1β的含量幾乎沒有變化。
　　另

6、外，本研究在體外用旋毛蟲肌幼蟲ES抗原作用于健康小鼠腹腔巨噬細胞，并應用熒光定量PCR對細胞內(nèi)NOD1、RIP2和NF-κB基因表達水平進行監(jiān)測，Western blot對細胞內(nèi)NOD1、RIP2、NF-κB p65、NF-κB p-p65表達量進行測定，ELISA測定細胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的變化。熒光定量PCR結果表明，在一定的ES抗原作用濃度和時間范圍內(nèi)，細胞中各目的基因的表達量均隨作用濃度和時間的增加而

7、下降。Western blot結果表明，ES抗原的刺激可以使細胞內(nèi)NOD1、RIP2和NF-κB p-p65蛋白表達量增加。ELISA結果顯示，ES抗原的作用可以使細胞TNF-α和IL-6分泌量增多，但IL-1β變化不明顯。
　　以上研究結果表明，旋毛蟲感染可以引起小鼠NOD1受體的激活，上調NOD1受體通路中關鍵分子RIP2和下游分子NF-κB的表達，促進細胞因子TNF-α和IL-6的分泌。旋毛蟲肌幼蟲ES抗原可以激活并調節(jié)小鼠