外源性NO對(duì)旋毛蟲肌幼蟲殺傷作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:初步觀察外源性NO對(duì)旋毛蟲肌幼蟲的殺傷作用和對(duì)旋毛蟲肌幼蟲細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及其相關(guān)機(jī)制探討。
　　方法:取河南株旋毛蟲感染的BALB/c小鼠肌肉組織消化,分離幼蟲配制成懸液。48孔板中每孔加入蟲體混懸液,再加入各組試劑,余下用不完全RPMI-1640培養(yǎng)液補(bǔ)充至1ml。各實(shí)驗(yàn)組SNP分別為0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L;SNP+血紅蛋白(Hb)0.15mmol/L、SNP+FeSO4

2、0.15mmol/L、SNP+L-cyst1.00mmol/L、SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L,后4組SNP濃度均為1.00mmol/L,設(shè)空白對(duì)照組,每組重復(fù)3次,置37℃5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在4天內(nèi)連續(xù)每天觀察,鏡檢蟲體,計(jì)算第2、3、4天蟲體死亡率。培養(yǎng)結(jié)束后收集蟲體采用熒光(Hoechst33342、碘化丙啶)雙染法、HE染色和TUNEL法原位檢測細(xì)胞凋亡,并用透射電鏡觀察殺傷后肌幼

3、蟲細(xì)胞凋亡變化,統(tǒng)計(jì)分析第4天各實(shí)驗(yàn)組對(duì)旋毛蟲肌幼蟲殺傷的差異。
　　結(jié)果:1.在體外培養(yǎng)第2、3、4天,SNP0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L組旋毛蟲肌幼蟲死亡率均高于空白對(duì)照組,且死亡率隨SNP濃度上升、用藥時(shí)間延長而升高。2.于培養(yǎng)第4天,除SNP0.02mmol/L組與空白對(duì)照組死亡率比較檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),SNP0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/

4、L實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組死亡率比較檢驗(yàn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),SNP0.20mmol/L與SNP0.50mmol/L實(shí)驗(yàn)組死亡率比較檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;加入不同抑制劑后,SNP1.00mmol/L實(shí)驗(yàn)組與SNP+Hb0.15mmol/L、SNP+FeSO40.15mmol/L、SNP+L-cyst1.00mmol/L、SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L各實(shí)驗(yàn)組死亡率比較檢驗(yàn)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

5、.05),SNP1.00mmol/L+Hb0.15mmol/L與SNP1.00mmol/L+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L實(shí)驗(yàn)組死亡率比較檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,SNP1.00mmol/L+FeSO40.15mmol/L與SNP1.00mmol/L+L-cyst1.00mmol/L實(shí)驗(yàn)組死亡率比較檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.Hoechst33342和碘化丙啶雙染,于不同濃度SNP實(shí)驗(yàn)組觀察到發(fā)出強(qiáng)藍(lán)

6、、弱紅熒光的死亡蟲體;TUNEL法中在SNP1.00mmol/L實(shí)驗(yàn)組蟲體切片中觀察到散在單一分布染成棕褐色的凋亡細(xì)胞;透射電鏡在SNP1.00mmol/L實(shí)驗(yàn)組肌幼蟲切片中觀察到較典型的凋亡細(xì)胞形態(tài);HE染色法無法區(qū)別細(xì)胞凋亡與否。
　　結(jié)論:外源性NO對(duì)旋毛蟲肌幼蟲具有殺傷作用,且這種作用在一定濃度范圍內(nèi)還存在劑量效應(yīng);外源性NO對(duì)旋毛蟲肌幼蟲細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡作用;Hb、FeSO4、L-cyst對(duì)外源性NO的殺傷具有抑制作用。