實(shí)驗(yàn)感染小鼠肉汁中抗旋毛蟲(chóng)抗體水平的觀察.pdf

1、旋毛蟲(chóng)病是一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲(chóng)病，主要因生食或半生食含有旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)囊包的豬肉或其它動(dòng)物肉類而感染。因此，對(duì)肉類及肉制品中進(jìn)行旋毛蟲(chóng)檢疫是旋毛蟲(chóng)病防治工作的重要內(nèi)容。目前用于肉類中旋毛蟲(chóng)檢疫的方法有旋毛蟲(chóng)鏡檢查法和人工消化法，但前者的敏感性低，而后者操作較復(fù)雜不易推廣應(yīng)用。由于IgG抗體在宿主血液和組織液內(nèi)均有分布，應(yīng)用免疫學(xué)方法從動(dòng)物肉汁中進(jìn)行抗旋毛蟲(chóng)抗體的檢測(cè)有望用于旋毛蟲(chóng)的檢疫。然而，關(guān)于動(dòng)物感染旋毛蟲(chóng)后肉汁中抗體水平的動(dòng)態(tài)變化

2、尚未見(jiàn)報(bào)道。鑒于此，本文應(yīng)用旋毛蟲(chóng)小鼠動(dòng)物模型，通過(guò)間接ELISA對(duì)不同劑量旋毛蟲(chóng)感染小鼠后不同時(shí)間血清和肉汁的抗體水平進(jìn)行了研究；并對(duì)小鼠肌肉在不同溫度下保存不同時(shí)間后肉汁抗體水平的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了觀察。 材料和方法 1.對(duì)ELISA檢測(cè)旋毛蟲(chóng)感染小鼠肉汁抗體的最適條件進(jìn)行了選擇，包括抗原的最適包被濃度及血清最佳稀釋度，酶標(biāo)二抗、肉汁最佳稀釋液及最佳稀釋度的選擇。 2.將300只健康昆明小鼠隨機(jī)分成3組，每組10

3、0只。每組分別感染旋毛蟲(chóng)100條/只(輕度感染組)、300條/只(中度感染組)和500條/只(重度感染組)，觀察小鼠感染不同劑量旋毛蟲(chóng)后不同時(shí)間(1-18周)血清及肉汁抗體水平的變化。 3.將32只健康昆明小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只。每只分別感染50、100、300、500條旋毛蟲(chóng)，感染6后周觀察小鼠膈肌蟲(chóng)荷與血清及肉汁抗體水平的關(guān)系。 4.將70只健康昆明小鼠隨機(jī)分成5組，每組14只。5組分別感染不同種的旋毛蟲(chóng)(旋毛蟲(chóng)

4、、鄉(xiāng)土旋毛蟲(chóng)、布氏旋毛蟲(chóng)、偽旋毛蟲(chóng)、納氏旋毛蟲(chóng))，每只感染500條幼蟲(chóng)。感染后6周觀察小鼠膈肌蟲(chóng)荷，并用旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原檢測(cè)感染不同種旋毛蟲(chóng)小鼠的血清和肉汁抗體平。 5.將30只感染旋毛蟲(chóng)小鼠(500條幼蟲(chóng)/只)，感染40天后剖殺，制備混合肉樣，每份混合肉樣重1g，分別置于塑料容器中密閉，在4℃保存1-7天及-20℃保存1-20周，觀察肉樣保存不同時(shí)間后肉汁抗體水平的變化

5、。 結(jié)果 1.選擇了ELISA檢測(cè)抗旋毛蟲(chóng)抗體的最適條件。ES抗原的最適包被濃度為5μg/ml，血清最佳稀釋度為1:50，包被抗原為ES抗原，酶標(biāo)二抗為HRP--羊抗小鼠IgG，稀釋液為含3％脫脂奶粉的PBST，肉樣與稀釋液比例為1g肉樣用4ml稀釋液。 2.每只感染100、300、500條旋毛蟲(chóng)的輕、中、重度感染組小鼠血清及肉抗體水平均隨均染后時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高，重度感染組的抗體檢出時(shí)間比輕度感染組早1周。在

6、感染后第8周，3個(gè)感染組的血清及肉汁抗體水平達(dá)到高峰，隨后抗體水平雖有所下降，抗體陽(yáng)性率仍均為100％并持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的感染后第18周。在3個(gè)感染組小鼠血清與肉汁抗體水平具有相關(guān)性(P＜0.05)。 3.感染不同劑量旋毛蟲(chóng)(50、100條、300、500條)的小鼠，感染后6周的膈肌蟲(chóng)荷與血清及肉汁抗體水平均無(wú)相關(guān)性，但與感染劑量有相關(guān)性(r=0.999，P＜0.05)。4.用不同種旋毛蟲(chóng)感染小鼠后發(fā)現(xiàn)，旋毛蟲(chóng)感染的小鼠肌肉蟲(chóng)荷

7、最高(400.2±143.9)，鄉(xiāng)土旋毛蟲(chóng)感染小鼠的蟲(chóng)荷最低(225.6±81.6)，而布氏旋毛蟲(chóng)、偽旋毛蟲(chóng)及納氏旋毛蟲(chóng)感染小鼠的肌肉蟲(chóng)荷量適中。用旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)ES抗原ELISA檢測(cè)分別感染不同種旋毛蟲(chóng)小鼠的血清及肉汁抗旋毛蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率均為100％。鄉(xiāng)土旋毛蟲(chóng)、布氏旋毛蟲(chóng)、偽旋毛蟲(chóng)、納氏旋毛蟲(chóng)感染小鼠血清及肉汁抗體水平相比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，且血清及肉汁抗體水平具有相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)果表明在旋毛蟲(chóng)、鄉(xiāng)土旋毛蟲(chóng)、布氏

8、旋毛蟲(chóng)、偽旋毛蟲(chóng)及納氏旋毛蟲(chóng)感染時(shí)，均可用肉汁替代血清作為旋毛蟲(chóng)病的檢測(cè)樣本。 5.感染旋毛蟲(chóng)小鼠肌肉在4℃保存7天后與第1天相比肉汁抗體水平(OD值)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。感染旋毛蟲(chóng)小鼠肌肉在-20℃保存8周的肉汁抗體水平與保存1周的相比無(wú)明顯下降(P＞0.05)；雖然保存10周的肉汁抗體水平與保存1周的相比已有顯著性差異(P＜0.05)，但旋毛蟲(chóng)抗體仍均陽(yáng)性并持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的保存20周。 結(jié)論 1.

9、感染不同劑量旋毛蟲(chóng)小鼠的血清及肉汁抗體水平均隨感染后時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高，感染后第8周達(dá)高峰，隨后抗體水平有所下降，但可持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的感染后第18周。肉汁抗體與血清抗體水平具有相關(guān)性，肉汁可替代血清作為旋毛蟲(chóng)病的檢測(cè)樣本。 2.感染旋毛蟲(chóng)小鼠的肌肉蟲(chóng)荷與血清及肉汁抗體水平無(wú)相關(guān)性，但與感染劑量有相關(guān)性； 3.感染旋毛蟲(chóng)的小鼠肌肉4℃保存1周和-20℃保存8周對(duì)肉汁抗體的檢測(cè)無(wú)明顯影響，在-20℃保存20周的所有肉樣中