苯妥英鈉聚氰基丙烯酸正丁酯納米微粒的制備及抗癲癇的藥效學(xué)研究.pdf

1、目的： (1)初選苯妥英鈉聚氰基丙烯酸正丁酯納米微粒(DPH-PBCA-NPs)的制備方法，并對制備工藝進行優(yōu)化，建立DPH-PBCA-NPs最佳的制備方法和工藝。 (2)利用Tween-80對DPH-PBCA-NPs進行表面修飾，探討Tween-80對：DPH-PBCA-NPs進行表面修飾的可行性?？疾霥PH-PBCA-NPs和Tween-80修飾的DPH-PBCA-NPs體外釋藥規(guī)律，探討其緩釋效應(yīng)。 (3)

2、利用癲癇動物模型評價DPH-PBCA-NPs和Tween-80修飾的DPH-PBCA-NPs的抗癲癇療效，探討納米載藥系統(tǒng)的優(yōu)越性。 方法： (1)選擇α-氰基丙烯酸正丁酯(α-butylcyanoacrylate，α-BCA)為載體，應(yīng)用乳化聚合包入法、乳化聚合吸附法和界面聚合法制備DPH-PBCA-NPs，考察DPH-PBCA-NPs的粒徑、形狀、載藥量、包封率和Zeta電位等指標(biāo)，初選出制備方法。 (2)通

3、過單因素試驗結(jié)合正交試驗對初選DPH-PBCA-NPs的制備方法進行工藝優(yōu)化，確立DPH-PBCA-NPs最佳的制備方法和工藝。 (3)利用Tween-80作為表面活性劑對DPH-PBCA-NPs進行表面修飾，比較Tween-80修飾前后納米微粒的變化。 (4)采用動態(tài)透析法進行體外釋藥，對DPH-PBCA-NPs和Tween-80修飾的DPH-PBCA-NPs體外釋藥規(guī)律進行研究。 (5)構(gòu)建氯化鋰-匹羅卡品急

4、性癲癇大鼠模型，利用視頻腦電監(jiān)測儀，觀察腦電圖動態(tài)變化過程和致癇大鼠的行為學(xué)改變，評估DPH-PBCA-NPs和Tween-80修飾的DPH-PBCA-NPs的抗癲癇療效。 (6)統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件包對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用t檢驗和方差分析對各組數(shù)據(jù)進行比較；計數(shù)資料采用X<'2>檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： (1)乳化聚合包入法制備的DPH

5、-PBCA-NPs，透射電子顯微鏡顯示納米微粒相互粘連，形狀不勻稱，納米粒度分析儀顯示粒徑分布不均勻，納米膠體溶液中出現(xiàn)絮狀物和沉淀。而乳化聚合吸附法和界面聚合法制備的DPH-PBCA-NPs，納米微粒形狀呈均勻球形，分散良好，呈現(xiàn)單一分布峰，分布集中。因此，初選出乳化聚合吸附法和界面聚合法，并對其制備工藝進行研究。 (2)通過單因素試驗考察了pH值、苯妥英鈉用量、攪拌速度、攪拌時間以及反應(yīng)物體積比(PBCA-NPs與苯妥英鈉溶

6、液)對乳化聚合吸附法制備的DPH-PBCA-NPs的粒徑、載藥量和包封率的影響，確定pH值為7、攪拌時間2h作為基本的制備條件。對苯妥英鈉用量、PBCA-NPs膠體溶液體積和攪拌速度設(shè)計正交試驗，確定苯妥英鈉75mg、PBCA-NPs體積35ml、攪拌速度1，000rpm為最佳的制備條件。 (3)優(yōu)化后DPH-PBCA-NPs乳化聚合吸附法的制備工藝如下：當(dāng)反應(yīng)體積為40ml時，苯妥英鈉用量75mg，PBCA-NPs用量35ml

7、，攪拌速度1，000 rpm，反應(yīng)體系的pH值為7，溫度25℃，攪拌時間2h。該工藝條件制備的DPH-PBCA-NPs性狀及各種指標(biāo)如下：納米微粒呈球形，形態(tài)均勻，分散性佳，平均粒徑120.40±5.32nm，跨度0.57，載藥量22.1±0.41％，包封率82.51±1.53％，Zeta電位-17.8mV。 (4)通過單因素試驗考察了pH值、苯妥英鈉用量、三油酸甘油酯用量、水相與有機相體積比(W/O)以及攪拌速度對界面聚合法制

8、備DPH-PBCA-NPs的粒徑、載藥量和包封率的影響，確定pH 7，攪拌速度800rpm作為基本的制備條件。對苯妥英鈉用量、三油酸甘油酯用量以及水相與有機相體積比設(shè)計正交試驗，確定苯妥英鈉125mg、三油酸甘油酯0.15ml、水相與有機相體積比1∶1為最佳的制備條件。 (5)優(yōu)化后DPH-PBCA-NPs界面聚合法制備工藝如下：當(dāng)反應(yīng)體積為30ml時，苯妥英鈉量125mg，水相與有機相體積比(W/O)1∶1，三油酸甘油酯0.1

9、5ml，反應(yīng)體系pH值為7，攪拌速度800 rpm，1％(w/v)的Dextran-70，α-BCA為1％(v/v)，溫度25℃，攪拌時間3h。該工藝條件制備的DPH-PBCA-NPs性狀及各種指標(biāo)如下：納米粒的形態(tài)均勻，呈球形，分散性佳。平均粒徑189.80±3.45 mm，跨度0.47，載藥量39.82±0.56％，包封率95.56±1.35％，Zeta電位-34.8mV。 (6)Tween-80修飾后DPH-PBCA-NP

10、s的粒徑減小，與未修飾的DPH-PBCA-NPs相比具有顯著性差異(t=3.813，P=0.001)，Zeta電位也有明顯的升高。體外釋藥結(jié)果表明乳化聚合吸附法和界面聚合法制備的DPH-PBCA-NPs及Tween-80修飾的DPH-PBCA-NPs均具有緩釋性。 (7)成功構(gòu)建氯化鋰-匹羅卡品急性癲癇大鼠模型，致癇大鼠在行為和腦電圖上均表現(xiàn)出了癲癇持續(xù)狀態(tài)。行為學(xué)結(jié)合腦電圖考察DPH-PBCA-NPs和Tween-80修飾的D

11、PH-PBCA-NPs對致癇大鼠的抗癲癇療效，Tween-80修飾的DPH-PBCA-NPs組有效率為91.67％，DPH-PBCA-NPs組有效率為54.55％，Tween-80修飾的DPH-PBCA-NPs療效優(yōu)于DPH-PBCA-NPs(X<'2>=3.923，P=0.048)和苯妥英鈉(X<'2>=4.557，P=0.033)，DPH-PBCA-NPs的有效率高于苯妥英鈉普通劑型(50％)，二者相比無顯著性差異(X<'2>=0.

12、043，P=0.835)。 結(jié)論 (1)乳化聚合吸附法和界面聚合法均可以制備出粒徑合適、形態(tài)均勻、載藥量和包封率良好的DPH-PBCA-NPs，界面聚合法制備的DPH-PBCA-NPs穩(wěn)定性優(yōu)于乳化聚合吸附法。 (2)Tween-80修飾后的DPH-PBCA-NPs粒徑減小，Zeta電位升高，有利于透過血腦屏障。體外釋藥顯示乳化聚合法吸附法和界面聚合法制備的DPH-PBCA-NPs和Tween-80修飾的DPH-