聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒載BDNF基因的制備及其對(duì)大鼠顱腦損傷治療作用的研究.pdf

1、目的:制備聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒后攜帶腦神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor BDNF)基因形成復(fù)合物，觀察復(fù)合物對(duì)顱腦有損傷的大鼠的治療作用。
　　方法:本次實(shí)驗(yàn)使用乳化聚合法制作聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒(PBCA-NPs)，用透射電子顯微鏡分析納米粒的形態(tài)以及粒徑。構(gòu)建真核表達(dá)載體PEGFP-BDNF,用HindⅢ，SalⅠ酶雙酶切以后進(jìn)行鑒定及測(cè)序，然后用PBCA-NPs進(jìn)行包裹

2、制成PBCA-PEGFP-BDNF。按照隨機(jī)數(shù)字表法將48只雄性SD大鼠分為空白組、PBCA組、PEGFP-BDNF組和PBCA-PEGFP-BDNF組，每組12只。采用自由落體致傷原理制備顱腦損傷大鼠模型后分別注入生理鹽水、PBCA納米粒、質(zhì)粒PEGFP-BDNF、PBCA-PEGFP-BDNF1 mL。7天后取大鼠右側(cè)大腦創(chuàng)傷周圍腦組織100mg，采用RT-PCR檢測(cè)大鼠腦組織中BDNF mRNA的表達(dá);使用熒光顯微鏡、Wester

3、n blotting及免疫組化檢測(cè)BDNF蛋白在大鼠腦組織中的表達(dá)情況;采用Morris水迷宮試驗(yàn)檢測(cè)PBCA-PEGFP-BDNF對(duì)于顱腦損傷大鼠的治療作用。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)所制得的PBCA-NPs粒徑均勻、電動(dòng)電位較高，DNA負(fù)載率為(62.23±2.15)％。采用PBCA-NPs包裹PEGFP-BDNF并轉(zhuǎn)染大鼠后可見BDNF在模型大鼠腦組織內(nèi)表達(dá)增高。RT-PCR的結(jié)果顯示，4組大鼠BDNF mRNA的表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(F值為112.668，P值為0.000)，與前三組相比較，PBCA-PEGFP-BDNF組的BDNF mRNA表達(dá)量明顯升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Western blotting結(jié)果顯示，4組大鼠BDNF蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值為66.629，P值為0.000)，PEGFP-BDNF組中BDNF蛋白的表達(dá)高于前兩組，而PBCA-PEGFP-BDNF組中BDNF的表達(dá)明顯高于前3組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0