遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系致病基因的定位與突變分析.pdf

1、2003年,中國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室與中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院合作,采集到一個(gè)遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系,該家系已遺傳了4代,表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳,我們采集了家系中20個(gè)成員血樣,其中患者10人.為了得到該家系的致病基因,我們采取定位、侯選基因突變檢測(cè)的方法對(duì)該家系致病基因進(jìn)行研究.首先,應(yīng)用基因組掃描方法對(duì)該遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系疾病基因進(jìn)行排除定位,我們利用8,11和19號(hào)染色體上的微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行基因分型,再對(duì)該家系進(jìn)行連鎖分析

2、,在D11S4191和D11S935分別得到Lod值1.60和1.03,支持該家系致病基因與11p11-p13的EXT2連鎖,然后對(duì)該遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系的侯選基因EXT2基因進(jìn)行突變檢測(cè),PCR擴(kuò)增EXT2基因的編碼區(qū)及外顯子與內(nèi)含子交界處,直接測(cè)序分析尋找突變,發(fā)現(xiàn)一個(gè)IVS2+1G→A(536+1G→A)雜合突變,對(duì)該家系所有樣本進(jìn)行測(cè)序,發(fā)現(xiàn)該變異與疾病表型共分離,在50個(gè)家系外正常對(duì)照中未發(fā)現(xiàn)該變異.該突變不在編碼區(qū),是

3、一個(gè)剪接位點(diǎn)的改變.最后我們利用RT-PCR證實(shí):該剪接位點(diǎn)的改變激活了EXT2外顯子2內(nèi)一個(gè)潛在的剪接供體位點(diǎn),新的剪接發(fā)生在外顯子2的第315與316堿基之間,導(dǎo)致編碼區(qū)發(fā)生了從316-536共221個(gè)堿基的缺失.統(tǒng)計(jì)分析認(rèn)為在EXT2基因的2和8號(hào)外顯子中包含有66％突變,而我室家系庫(kù)尚有15個(gè)外生性骨疣家系沒有找到突變,所以我們選取家系中的先證者,直接測(cè)序該基因的2和8號(hào)外顯子.結(jié)果我們?cè)谄渲兴膫€(gè)家系中一共找到了三個(gè)無(wú)義突變.其