小鼠皮膚切創(chuàng)愈合與磷酸化p38MAPK表達(dá)的時(shí)間相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 皮膚損傷愈合是一個(gè)復(fù)雜的過程，包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、毛細(xì)血管生成、纖維化、結(jié)締組織收縮等過程。p38MAPK(p38mitogen-activated protein kinase，p38MAPK)為絲裂酶原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族的一個(gè)重要的亞族，可通過細(xì)胞性的壓力和炎癥刺激發(fā)生磷酸化而激活，與重要的細(xì)胞反應(yīng)有關(guān)，比如炎

2、性反應(yīng)和凋亡。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)和Western blot的方法，檢測(cè)小鼠皮膚損傷區(qū)損傷后各時(shí)間磷酸化p38MAPK(phospho-p38MAPK，p-p38MAPK)的表達(dá)情況，探討磷酸化p38MAPK在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時(shí)間推斷上應(yīng)用的可能性。 實(shí)驗(yàn)材料與方法: 健康成年清潔級(jí)昆明系小鼠33只，體重35～40g，隨機(jī)分為11組，其中1組為正常對(duì)照組。乙醚氣體吸入麻醉，背部剪毛處理后，在背部中央做一縱

3、行長(zhǎng)1.5cm皮膚全層切口，深達(dá)筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎處死，取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。每組1/2皮膚固定后石蠟包埋，制作5μm連續(xù)切片；另1/2皮膚用冷生理鹽水清洗后加蛋白裂解液勻漿，用于Western blot蛋白印跡分析。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和Western blot的方法檢測(cè)30例小鼠皮膚，切創(chuàng)后各時(shí)間磷酸化p38MAPK表達(dá)情況，以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織

4、作對(duì)照，顯微鏡×400倍下，在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞率。應(yīng)用Fluochem V2.0軟件測(cè)各片段的平均光密度值，測(cè)得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。用SPSS11.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果: 正常組織內(nèi)含有少量的磷酸化p38MAPK。傷后6h，皮膚中可見少數(shù)多核粒細(xì)胞表達(dá)磷酸化p38MAPK。傷后12～24

5、h，大量浸潤(rùn)的多核粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞磷酸化p38MAPK呈陽性。傷后1～5d隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，磷酸化p38MAPK陽性細(xì)胞主要以單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞為主。傷后5～14d磷酸化p38MAPK表達(dá)主要在成纖維細(xì)胞中。傷后0～3h，磷酸化p38MAPK陽性細(xì)胞比率比較低，隨著傷后時(shí)間的延長(zhǎng)，磷酸化p38MAPK陽性率逐漸增加，12h達(dá)到高峰。傷后1～5d一直呈高表達(dá)狀態(tài)，傷后3d時(shí)最高。傷后7～14d，磷酸化p38MAPK陽性率逐漸下降。除傷

6、后3d與5d陽性細(xì)胞率無顯著性差異外(P>0.05)，其它各組與相鄰上組的陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞率差異均有顯著性意義(P<0.05)。Western blot的結(jié)果顯示正常皮膚內(nèi)有磷酸化p38MAPK的表達(dá)。傷后0～12h磷酸化p38MAPK蛋白含量逐漸增高，12h達(dá)到峰值。傷后1～5d磷酸化p38MAPK以3d時(shí)蛋白含量較高，傷后7～14d蛋白含量逐漸下降。除0h與對(duì)照組間平均光密度值差異無顯著性意義外(P>0.05)，其余各組間平均光