小鼠皮膚切創(chuàng)愈合與磷酸化p38MAPK表達的時間相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 皮膚損傷愈合是一個復雜的過程，包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、毛細血管生成、纖維化、結(jié)締組織收縮等過程。p38MAPK(p38mitogen-activated protein kinase，p38MAPK)為絲裂酶原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族的一個重要的亞族，可通過細胞性的壓力和炎癥刺激發(fā)生磷酸化而激活，與重要的細胞反應有關(guān)，比如炎

2、性反應和凋亡。本研究應用免疫組織化學和Western blot的方法，檢測小鼠皮膚損傷區(qū)損傷后各時間磷酸化p38MAPK(phospho-p38MAPK，p-p38MAPK)的表達情況，探討磷酸化p38MAPK在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應用的可能性。 實驗材料與方法: 健康成年清潔級昆明系小鼠33只，體重35～40g，隨機分為11組，其中1組為正常對照組。乙醚氣體吸入麻醉，背部剪毛處理后，在背部中央做一縱

3、行長1.5cm皮膚全層切口，深達筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎處死，取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。每組1/2皮膚固定后石蠟包埋，制作5μm連續(xù)切片；另1/2皮膚用冷生理鹽水清洗后加蛋白裂解液勻漿，用于Western blot蛋白印跡分析。應用免疫組織化學和Western blot的方法檢測30例小鼠皮膚，切創(chuàng)后各時間磷酸化p38MAPK表達情況，以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織

4、作對照，顯微鏡×400倍下，在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野，計數(shù)細胞總數(shù)、陽性細胞數(shù)及陽性細胞率。應用Fluochem V2.0軟件測各片段的平均光密度值，測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示。用SPSS11.0 for Windows進行單因素方差分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果: 正常組織內(nèi)含有少量的磷酸化p38MAPK。傷后6h，皮膚中可見少數(shù)多核粒細胞表達磷酸化p38MAPK。傷后12～24

5、h，大量浸潤的多核粒細胞和部分單核細胞磷酸化p38MAPK呈陽性。傷后1～5d隨著時間的延長，磷酸化p38MAPK陽性細胞主要以單核細胞和成纖維細胞為主。傷后5～14d磷酸化p38MAPK表達主要在成纖維細胞中。傷后0～3h，磷酸化p38MAPK陽性細胞比率比較低，隨著傷后時間的延長，磷酸化p38MAPK陽性率逐漸增加，12h達到高峰。傷后1～5d一直呈高表達狀態(tài)，傷后3d時最高。傷后7～14d，磷酸化p38MAPK陽性率逐漸下降。除傷

6、后3d與5d陽性細胞率無顯著性差異外(P>0.05)，其它各組與相鄰上組的陽性細胞數(shù)及陽性細胞率差異均有顯著性意義(P<0.05)。Western blot的結(jié)果顯示正常皮膚內(nèi)有磷酸化p38MAPK的表達。傷后0～12h磷酸化p38MAPK蛋白含量逐漸增高，12h達到峰值。傷后1～5d磷酸化p38MAPK以3d時蛋白含量較高，傷后7～14d蛋白含量逐漸下降。除0h與對照組間平均光密度值差異無顯著性意義外(P>0.05)，其余各組間平均光