小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中MGL表達及分布的研究.pdf

1、目的：
　　 皮膚損傷愈合是一個連續(xù)而又復(fù)雜的生理過程,其大致可分為三個階段:急性滲出期、纖維增生期和組織重建期。在急性滲出期,各種類型的炎癥細胞,例如中性粒細胞和巨噬細胞,浸潤到損傷區(qū)域參與清除損傷壞死組織、異物及入侵的病原體等。在纖維增生期,肌纖維母細胞主要參與損傷組織的修復(fù)。許多實驗證實,在皮膚損傷愈合過程中有各種各樣的細胞因子、生長因子和趨化因子的參與。研究表明內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)廣泛參與炎癥反應(yīng)。內(nèi)源性大麻素水解酶主要有兩

2、種,即脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)和單?；视椭久?MGL)。MGL是一種重要的內(nèi)源性大麻素水解酶,其主要作用是水解花生四烯酸甘油酯(2-AG)。有研究證實,MGL在嚙齒類動物的腦組織中高度表達,并且在維持內(nèi)源性大麻素水平方面起到重要作用。到目前為止,尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)MGL在皮膚損傷愈合過程中的研究。本實驗首次研究小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中不同損傷時間段MGL的表達和分布情況,探討MGL在皮膚損傷愈合過程中的作用及其應(yīng)用于損傷時間推斷的可能性

3、。
　　 實驗材料與方法：
　　 健康成年雄性BALB/c小鼠45只,體質(zhì)量35～40g,隨機分為9組。其中8組為皮膚切創(chuàng)組,另1組為對照組。腹腔注射戊巴比妥鈉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術(shù)消毒,在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口,深達筋膜。傷后每只小鼠單獨飼養(yǎng),防止感染,保持12h的晝夜交替生活節(jié)律。分別于傷后6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠麻醉后脫頸椎處死,取傷口處1.5cm×1.0cm

4、皮膚組織。各組5只小鼠的皮膚樣本均分為兩部分,一部分用于HE染色和免疫熒光染色,另一部分用于Western blot和real-time PCR檢測。對照組5只小鼠麻醉后背部剪毛,不做切創(chuàng),取相同部位同等大小皮膚。應(yīng)用免疫熒光,Western blot及real-time PCR技術(shù)檢測小鼠皮膚切創(chuàng)后不同時間MGL表達變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照,顯微鏡×400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野,計數(shù)細胞總數(shù)、陽性細胞

5、數(shù)及陽性細胞率。應(yīng)用Scion image軟件測各片段的平均光密度值,測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(-x±s)表示。用SPSS13.0 forWindows進行單因素方差分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 正常小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺均表達MGL。皮膚切創(chuàng)后6～12h,在皮膚損傷區(qū)及其周邊區(qū)可見大量中性粒細胞表達MGL;傷后1～5d,MGL陽性細胞主要以巨噬細胞為主;傷后7～14d,MGL主要表達

6、在肌纖維母細胞中。MGL陽性細胞率于5d達高峰。中性粒細胞表達MGL的陽性率于12h達高峰;巨噬細胞表達MGL的陽性率于5d達高峰;肌纖維母細胞表達MGL的陽性率于7d達高峰。經(jīng)Western blot檢測顯示,對照組及各個損傷時間段小鼠皮膚都有MGL陽性條帶,其中5d為MGL蛋白表達高峰。Real-time PCR結(jié)果顯示,對照組及各個損傷時間段小鼠皮膚都有MGLmRNA表達,其中5d為表達高峰。
　　 結(jié)論：