小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ⅱ型大麻素受體(CB2R)表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　 皮膚損傷愈合是一個(gè)復(fù)雜而連續(xù)的過程，其大致可以分為三個(gè)階段：炎癥期、增殖期和重建修復(fù)期，其各階段是相互聯(lián)系，相互影響的，有大量細(xì)胞、細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的參與其間。Ⅱ型大麻素受體（cannabinoid receptor type 2，CB2R）為G蛋白偶聯(lián)受體，能激活多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，主要分布于外周，如免疫系統(tǒng)和造血細(xì)胞。新近研究發(fā)現(xiàn)CB2R與多種不同疾病和組織損傷有關(guān)，發(fā)揮重要的抗炎和抗纖維化的作用。本研究應(yīng)用免

2、疫組織化學(xué)染色和Western blot技術(shù)，檢測小鼠皮膚損傷區(qū)在損傷后不同時(shí)間CB2R表達(dá)的變化情況，探討CB2R在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時(shí)間推斷上應(yīng)用的可能性。
　　 實(shí)驗(yàn)材料與方法：
　　 健康成年清潔級昆明系小鼠50只，體質(zhì)量35g～40g，隨機(jī)分為10組，每組5只，其中1組為正常對照組。乙醚氣體吸入麻醉，背部剪毛處理后，常規(guī)手術(shù)消毒，在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口，深達(dá)筋膜，分別于傷后0h，

3、6h，12h，1d，3d，5d，7d，10d和14d將小鼠脫頸椎處死，取傷口處1.5cmx1.0cm皮膚組織，對照組小鼠取相同部位同等大小皮膚，以備HE染色、免疫組織化學(xué)染色和Western blot蛋白印跡技術(shù)應(yīng)用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和Western blot方法檢測50例小鼠皮膚切創(chuàng)后不同時(shí)間CB2R變化情況，以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照，顯微鏡x400倍下，在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞率。

4、應(yīng)用Fluochem V2.0軟件測各片段的平均光密度值，測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。用SPSS13.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。
　　 結(jié)果：
　　 免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，對照組CB2R表達(dá)于表皮、毛囊、皮脂腺、皮肌層、血管平滑肌、神經(jīng)纖維外膜及神經(jīng)纖維束束膜；傷后6h切創(chuàng)皮膚損傷區(qū)及周邊區(qū)多核粒細(xì)胞少量表達(dá)CB2R，12h-24h以單個(gè)核細(xì)胞陽性表達(dá)為主，

5、3d以單個(gè)核細(xì)胞和梭形成纖維細(xì)胞表達(dá)為主，5d-14d以梭形成纖維細(xì)胞為主。CB2R陽性細(xì)胞率于0h-3d逐漸升高，5d達(dá)最高峰，隨后逐漸下降。經(jīng)Western blotting檢測顯示，對照及各個(gè)損傷時(shí)間段都有CB2R陽性條帶，其中5d為CB2R表達(dá)高峰。
　　 結(jié)論：
　　 小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中，CB2R于損傷區(qū)及周邊區(qū)多核粒細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中表達(dá)，并具有規(guī)律性，提示CB2R可能參與皮膚損傷愈合，并可用