小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中c-jun表達(dá)及其與損傷時(shí)間相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：皮膚損傷愈合是一個(gè)復(fù)雜而連續(xù)的過程，包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、結(jié)締組織收縮和纖維化等過程。原癌基因c—jun是即刻早期基因jun家族成員之一，屬于堿性亮氨酸拉鏈家族核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子成員，可以結(jié)合在許多基因的啟動(dòng)子上參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控，其表達(dá)產(chǎn)物在多種基因表達(dá)、細(xì)胞凋亡、增殖、分化等過程中起重要作用。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和Western blot技術(shù)，檢測小鼠皮膚損傷區(qū)在損傷后不同時(shí)間段c—jun表達(dá)的變

2、化情況，探討c—jun在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時(shí)間推斷上應(yīng)用的可能性。 方法：健康成年(8周齡)清潔級(jí)昆明系小鼠55只，雌雄不限，體質(zhì)量35～40g，隨機(jī)分為11組。其中皮膚切創(chuàng)分為10個(gè)時(shí)間段組，另一組為正常對照組，每組均為5只小鼠。乙醚氣體吸入麻醉，背部剪毛處理后，常規(guī)手術(shù)消毒，在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口，深達(dá)筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎

3、處死，取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。對照組小鼠麻醉后背部剪毛，不做切創(chuàng)，觀察至14d，脫頸椎處死，取相同部位同等大小皮膚，以備HE染色、免疫組織化學(xué)染色和Western blot檢測應(yīng)用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和Western blot技術(shù)檢測55例小鼠皮膚切創(chuàng)后各時(shí)間段c—jun變化情況，以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照，顯微鏡×400倍下，在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞率。應(yīng)用Fluoc

4、hemV2.0軟件檢測各時(shí)間段的平均光密度值，測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：正常對照組小鼠皮膚中c—jun主要表達(dá)在表皮、毛囊和皮脂腺等處。傷后3h即可見少數(shù)多核粒細(xì)胞有c—jun表達(dá)。傷后6—24h，大量浸潤的多核粒細(xì)胞和部分單個(gè)核細(xì)胞c—jun呈陽性。傷后1～3d，c—jun陽性細(xì)胞主要以單個(gè)核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞為主

5、。傷后5～14d，c—jun主要在成纖維細(xì)胞中表達(dá)。傷后0h時(shí)c—jun陽性細(xì)胞率比較低，隨著傷后時(shí)間的延長，c—jun陽性細(xì)胞率逐漸增加，12h達(dá)到高峰。傷后1～5d一直呈高表達(dá)狀態(tài)。傷后7d時(shí)c—jun陽性細(xì)胞率達(dá)到第二峰，隨后逐漸下降。除傷后1d與3d陽性細(xì)胞率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P>0.05)，其它各組與相鄰上組的細(xì)胞總數(shù)及陽性細(xì)胞率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示正常對照皮膚內(nèi)有c—jun陽

6、性條帶，皮膚切創(chuàng)傷后各時(shí)間段組c—jun表達(dá)強(qiáng)度有一定規(guī)律。傷后0～12h，表達(dá)逐漸增強(qiáng)；12h達(dá)高峰。1～5d稍有下降；傷后7d，c—jun表達(dá)稍有上升，隨后表達(dá)漸降低。但12h組中c—jun表達(dá)相對較多，到14d時(shí)，c—jun基本與對照組表達(dá)情況一致。除0h與對照組間平均光密度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P>0.05)，其余各組間平均光密度值差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：1、正常對照組小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺中