大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ubiquitin的表達(dá)及其法醫(yī)學(xué)意義.pdf

1、目的：泛素(Ubiquitin)是熱休克蛋白家族中分子量最小的一員，在真核生物中廣泛存在，其分布非常豐富，從生殖細(xì)胞到各種體細(xì)胞都廣泛存在。它由76個(gè)氨基酸組成，分子量約8．5KD，其氨基酸序列高度保守。在應(yīng)激因素作用下，細(xì)胞內(nèi)形成各種異常蛋白質(zhì)，對(duì)細(xì)胞造成嚴(yán)重?fù)p傷，此時(shí)，Ubiquitin將會(huì)與之共價(jià)結(jié)合，再通過蛋白酶體將其降解，以恢復(fù)細(xì)胞的正常功能。這種蛋白質(zhì)與Ubiquitin結(jié)合的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)泛素化，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)泛素化參與了細(xì)

2、胞的多種生理過程。近年來的研究表明，在刺激、損傷等多種因素的作用下，Ubiquitin可被誘導(dǎo)產(chǎn)生，它與阿茨海默氏病、腫瘤等多種疾病或損傷有密切關(guān)系。目前，Ubiquitin在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究在世界范圍內(nèi)都顯得比較匱乏，尤其是對(duì)Ubiquitin與皮膚損傷以及由此產(chǎn)生的損傷時(shí)間推斷問題的研究更是幾乎一片空白。本實(shí)驗(yàn)建立大鼠皮膚切創(chuàng)模型，對(duì)ubiquitin在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中的表達(dá)情況和表達(dá)規(guī)律進(jìn)行研究，探討其在皮膚損傷中的作用及機(jī)制，

3、為解決損傷時(shí)間推斷這一法醫(yī)學(xué)難題提供新的方向和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法：采用完全隨機(jī)分組方法，根據(jù)造創(chuàng)后處死時(shí)間不同將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為傷后m、3h、6h、12h、ld、3d、6d、10d、14d組，另設(shè)一組為正常對(duì)照組，即未造創(chuàng)組。在預(yù)定時(shí)間分別處死大鼠，取創(chuàng)口邊緣處皮膚全層組織(對(duì)照組取與實(shí)驗(yàn)組相同部位之皮膚組織)，進(jìn)行HE染色和Ubiquitin免疫組化SP法染色，并對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行光鏡觀察、圖像分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以了解Ubiqui

4、tin在皮膚切創(chuàng)愈合過程中的表達(dá)情況和表達(dá)規(guī)律。 結(jié)果：1、創(chuàng)口愈合過程肉眼觀察：傷后1d內(nèi)，創(chuàng)口處痂皮形成；傷后3d內(nèi)，創(chuàng)緣皮膚紅腫消退；傷后6d內(nèi)，痂皮剝脫，肉芽組織形成；傷后10～14d，創(chuàng)口完全愈合。2、HE染色觀察：傷后1d內(nèi)，大量炎性細(xì)胞浸潤，早期以中性粒細(xì)胞浸潤為主，后期以單核一巨噬細(xì)胞浸潤為主；傷后3～6d，肉芽組織逐漸形成并大量增生；傷后lO～14d，肉芽組織逐漸成熟，炎性細(xì)胞消失，創(chuàng)口修復(fù)。正常對(duì)照組無上述改

5、變。3、免疫組化SP法染色觀察：傷后1d內(nèi)，Ubiquitin在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和大量浸潤的炎性細(xì)胞中染色呈陽性，傷后12h以前以中性粒細(xì)胞陽性染色為主，傷后12h以后以單核一巨噬細(xì)胞陽性染色為主；傷后3～6d，Ubiquitin在逐漸形成并大量增生的肉芽組織中呈陽性染色；傷后10～14d，Ubiquitin在逐漸成熟的肉芽組織中仍有陽性染色，后期以膠原纖維染色為主，但染色范圍和強(qiáng)度明顯減弱。正常對(duì)照組在表皮層、毛囊和皮脂腺等有弱陽性染

6、色，但強(qiáng)度較實(shí)驗(yàn)組弱且無上述實(shí)驗(yàn)組的染色改變。4、圖像分析結(jié)果：IOD值在傷后1h到傷后6d逐漸上升，傷后6d達(dá)到高峰，傷后10～14d，IOD值逐漸下降。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果：方差分析結(jié)果表明各組之間差異有顯著性意義(P<0．05)。組間兩兩比較表明，傷后6d組與其余各組差異有顯著性意義(P<0．05)，傷后14d組與正常對(duì)照組差異無顯著性意義(P＞O．05)。 結(jié)論：1、大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ubiquitin表達(dá)量的變化具有

7、規(guī)律性，呈現(xiàn)出表達(dá)升高期．表達(dá)高峰期．表達(dá)下降期這一有序性變化曲線，其中創(chuàng)傷后3～6d是其表達(dá)的高峰期，傷后第6d是其表達(dá)的頂峰。2、大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ubiquitin表達(dá)陽性的細(xì)胞或組織的變化具有規(guī)律性，呈現(xiàn)出早期以中性粒細(xì)胞表達(dá)為主，高峰期以單核．巨噬細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞表達(dá)為主，后期以成熟肉芽組織成分及膠原纖維表達(dá)為主的動(dòng)態(tài)變化趨勢。3、Ubiquitin在皮膚損傷中的表達(dá)變化規(guī)律可以為解決損傷時(shí)間推斷難題提供