小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中FAK和磷酸化FAK表達(dá)及其時間規(guī)律性變化的研究.pdf

1、目的： 皮膚損傷愈合大致分為三個階段，即炎癥期、纖維增生期和組織重建期。多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞參與皮膚損傷愈合的全過程，清除損傷、壞死的皮膚組織和入侵的病原體并重建損傷組織，對于損傷愈合具有重要作用。在炎癥期和纖維增生期損傷區(qū)內(nèi)多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的數(shù)量急劇增加；在組織重建期，這三種細(xì)胞的數(shù)量則顯著減少，直至傷口完全愈合。 粘著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK，也稱pp<'

2、125FAK>)是人們最初在用v-src轉(zhuǎn)化細(xì)胞時發(fā)現(xiàn)的一個主要酪氨酸磷酸化蛋白，是整合素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的關(guān)鍵分子之一，在細(xì)胞粘附過程中發(fā)揮著非常重要的作用。當(dāng)被整合素激活時FAK自身磷酸化，能夠直接或者通過相關(guān)激酶激活PI-3K(plaosphatidylinositol 3-kinase，PI-3K)、MAPK(mitogen-activated protein kinase，MAPK)和STAT(signal transduceran

3、d activator of transcription，STAT)等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，進(jìn)而與細(xì)胞內(nèi)一些相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相聯(lián)系，參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。這些細(xì)胞內(nèi)分子的相互作用在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中調(diào)節(jié)各種各樣的細(xì)胞功能，如擴(kuò)散、遷移、增殖、凋亡和細(xì)胞的存活。 本研究用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)和Westem blot方法檢測小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中FAK和磷酸化FAK在多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中的表達(dá)，進(jìn)而探討通過FAK的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及

4、其生物學(xué)作用，并討論通過檢測FAK和磷酸化FAK表達(dá)的規(guī)律推測皮膚損傷時間的可行性，進(jìn)一步揭示蛋白質(zhì)的磷酸化對皮膚損傷愈合的影響。 方法: 1、動物模型的建立及分組 2、FAK和磷酸化FAK的免疫組織化學(xué)染色(SP法) 3、陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)分析 4、FAK和磷酸化FAK的Western blot檢測 結(jié)論: 1、正常皮膚的表皮層、毛囊、皮脂腺和血管內(nèi)皮中表達(dá)FAK及磷酸化FAK，提示F

5、AK在生理狀態(tài)下就發(fā)揮生物學(xué)作用。 2、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中，F(xiàn)AK和phospho-FAK在多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中表達(dá)，并且在小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中，F(xiàn)AK對于多核粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的聚集、遷移及成纖維細(xì)胞的增殖起著重要作用。 3、在小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中，F(xiàn)AK和phospho-FAK陽性細(xì)胞率呈時間規(guī)律性變化，表明FAK和phospho-FAK可作為推斷皮膚切創(chuàng)損傷時間的指標(biāo)，且phospho-FAK要