Caspase-3在大鼠骨骼肌挫傷愈合過程中的表達及其時間規(guī)律性研究.pdf

1、本實驗在建立大鼠骨骼肌挫傷模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)、Western blot技術(shù)以及caspase-3活性測定技術(shù)對大鼠骨骼肌挫傷愈合過程中caspase-3的表達進行研究，用以推測caspase-3在骨骼肌挫傷愈合過程中的生物學(xué)作用，并對其表達時間變化規(guī)律在推斷損傷時間中的可應(yīng)用性進行了探討。 材料和方法： 一、動物模型的建立和分組健康成年的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只，體重220-

2、250g，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。隨機分為10組，每組3只，其中9組為實驗組，1組為對照組。 二、免疫組織化學(xué)染色 三、caspase-3的Western blot檢測 四、caspase-3活性測定 實驗結(jié)果： 一、挫傷組骨骼肌病理組織學(xué)變化傷后3h見挫傷處骨骼肌局部出血、水腫、變性，部分肌纖維斷裂，偶見少量多核粒細(xì)胞。6h部分骨骼肌胞漿均質(zhì)化，細(xì)胞核消失，骨骼肌間隙內(nèi)炎細(xì)胞增多。12h

3、挫傷的骨骼肌間隙及周邊出現(xiàn)較多量的炎細(xì)胞。1d挫傷的骨骼肌間隙及周邊大量的炎細(xì)胞。3d損傷處有大量的細(xì)胞核出現(xiàn)。5d天可見肌細(xì)胞核增殖，核均位于細(xì)胞中央。7d新形成的肌細(xì)胞進一步增多，可見膠原形成。10d再生過程更近一步，部分區(qū)域可見較多量的膠原形成。14d仍可觀察到骨骼肌再生和膠原形成。 二、挫傷周邊區(qū)caspase-3的免疫組織化學(xué)染色對照組骨骼肌未見陽性信號；挫傷周邊骨骼肌在損傷后3h開始出現(xiàn)弱陽性表達，隨時間延長陽性表達

4、逐漸增強，5d達到高峰，隨后陽性表達逐漸降低，14d仍然有較強的陽性表達。相鄰兩組之間caspase-3陽性表達的面積和積分光密度值均有顯著差異(P<0.05)。 三、caspase-3在挫傷區(qū)的表達損傷后3h可見挫傷區(qū)骨骼肌開始出現(xiàn)陽性表達；損傷后6h-1d，可見被炎細(xì)胞浸潤的骨骼肌表達caspase-3；損傷后3d，可見新形成的骨骼肌核位于細(xì)胞中央部位，胞漿內(nèi)有caspase-3陽性表達；傷后5-7d，可見新形成的肌細(xì)胞胞漿

5、內(nèi)有caspase-3表達；損傷后10-14d，融合的肌細(xì)胞內(nèi)仍然有caspase-3的表達。 四、挫傷周邊區(qū)caspase-3的Western blot結(jié)果分析對照組骨骼肌未見表達；隨后表達量逐漸上升，5d達到高峰，以后逐漸下降，14d時仍有表達。 五、挫傷周邊區(qū)caspase-3活性表達的倍增值： 與對照組相比，caspase-3活性倍增值隨損傷時間延伸而增高，損傷后12hcaspase-3的活性明顯增高達8

6、.6倍，5d時活性增高值達到最大為17.1倍，以后隨時間延伸，caspase-3的活性倍增值逐漸下降。相鄰兩組之間caspase-3活性表達的倍增值均有顯著差異(P<0.05)。 結(jié)論： 1、對照組大鼠下肢骨骼肌中無caspase-3表達； 2、大鼠骨骼肌挫傷后，挫傷周邊骨骼肌表達caspase-3且caspase-3被激活；提示大鼠骨骼肌挫傷后，挫傷周邊骨骼肌發(fā)生凋亡； 3、大鼠骨骼肌挫傷后，新形成的肌