大鼠骨骼肌挫傷后ASCT2 mRNA時(shí)序性表達(dá)研究.pdf

1、目的:
　　 應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠骨骼肌挫傷后細(xì)胞內(nèi)ASCT2 mRNA表達(dá)，分析其與挫傷的時(shí)間關(guān)系，旨為法醫(yī)學(xué)早期損傷時(shí)間的推斷探尋新的思路。
　　 方法:
　　 (1)選取成年雄性Sprague-Dawley大鼠96只，并且將其隨機(jī)分成3組，包括:生前損傷組(72只)、正常對(duì)照組（6只）、死后損傷組（18只）。生前損傷組動(dòng)物經(jīng)麻醉、固定于鼠板和褪毛后，將重力錘自由落下打擊右后肢大腿內(nèi)側(cè)肌群致骨骼肌挫

2、傷，分別于傷后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小時(shí)迅速頸椎脫臼處死，并取材。在生前損傷12、24、36小時(shí)組動(dòng)物左后肢大腿內(nèi)側(cè)骨骼肌取材，以比較正常肌肉和損傷肌肉之間ASCT2 mRNA表達(dá)水平。死后損傷組動(dòng)物按照處死并打擊致挫傷之后的時(shí)間間隔不同，分別6、12、18小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)取材。正常對(duì)照組動(dòng)物未經(jīng)打擊，直接頸椎脫臼處死;(2)使用Invitrogen TRIzol Reagent試劑盒提取肌肉組

3、織中總RNA，并且使用紫外分光光度計(jì)對(duì)總RNA純度進(jìn)行檢驗(yàn)，并根據(jù)紫外分光光度計(jì)所測(cè)得OD260/OD280的比值來(lái)評(píng)價(jià)核酸純度;(3)將RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以cDNA為模板、RPL13為內(nèi)參基因進(jìn)行Real-time PCR，采用2^-△△CT法比較其與正常肌肉組織中ASCT2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)根據(jù)紫外分光光度計(jì)所測(cè)得結(jié)果提示:總RNA完整性較理想，符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求;(2)目

4、的基因與內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率分別為89.5％和90.1％，相關(guān)系數(shù)均大于理想值0.98，表明直線性較好，定量準(zhǔn)確，擴(kuò)增效率較高且較為一致，表明RPL13作為ASCT2 mRNA的內(nèi)參基因較為合適;(3)損傷組肌肉組織中ASCT2 mRNA在挫傷后12、16、36、40小時(shí)表達(dá)量分別為正常組的196.40％、189.15％、182.54％和136.65％，損傷后4、8、20、24、28、32、44、48小時(shí)ASCT2 mRNA表達(dá)量與正常組

5、相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，說(shuō)明ASCT2 mRNA在損傷12至16小時(shí)其表達(dá)量迎來(lái)第一個(gè)高峰，隨后又降至正常水平，而到了損傷后36至40小時(shí)表達(dá)量又迎來(lái)第二個(gè)高峰，之后回落并趨于穩(wěn)定;(4)生前損傷組正常肌肉ASCT2 mRNA的表達(dá)相對(duì)于正常對(duì)照組，二者并無(wú)差異(P＞0.05);(5)正常對(duì)照組與死后損傷組的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的ASCT2mRNA表達(dá)量并不存在差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 (1) AS