大鼠骨骼肌挫傷愈合過(guò)程中外周血來(lái)源的纖維細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律的研究.pdf

1、目的：
　　 骨骼肌損傷愈合是一個(gè)典型的炎癥修復(fù)過(guò)程?？扇藶榈胤殖扇齻€(gè)階段:炎癥階段、增殖階段、再塑階段。這些階段在一定程度上相互重疊,沒(méi)有明確的時(shí)間界限。炎癥細(xì)胞的激活,如中性粒細(xì)胞的募集,巨噬細(xì)胞的聚集,及成纖維細(xì)胞的激活是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜且相互交流的事件。最近研究顯示,外周血來(lái)源的纖維細(xì)胞(circulating fibrocytes,CFCs)也可以浸潤(rùn)到傷口局部,通過(guò)轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞(myofibroblasts,Myf

2、bs),參與了骨骼肌損傷愈合。CFCs是骨髓來(lái)源的間充質(zhì)前體細(xì)胞,共表達(dá)造血干細(xì)胞抗原和成纖維細(xì)胞產(chǎn)物,諸如CD45和Ⅰ型前體膠原(procollagenⅠ,pColⅠ),被定義為一類(lèi)具有成纖維細(xì)胞特性的特殊白細(xì)胞亞群。在皮膚損傷愈合期間,CFCs可以占浸潤(rùn)細(xì)胞的10％左右,并推測(cè)CFCs在損傷愈合和組織修復(fù)進(jìn)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。除了轉(zhuǎn)化為Myfbs外,CFCs還可以通過(guò)其他可能的機(jī)制參與到損傷愈合,諸如:抗原呈遞;產(chǎn)生重要的細(xì)胞因

3、子、趨化因子和生長(zhǎng)因子;分泌細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM);促進(jìn)血管發(fā)生。到目前為止,尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)CFCs在骨骼肌挫傷愈合過(guò)程中的研究。本研究首次研究大鼠骨骼肌挫傷愈合過(guò)程中不同損傷時(shí)間段CFCs的分布情況,探討CFCs在骨骼肌損傷愈合過(guò)程中的作用及其在損傷時(shí)間推斷上應(yīng)用的可能性。
　　 材料與方法：
　　 健康成年的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠50只,體質(zhì)量220～250

4、g,隨機(jī)分為10組,每組5只。其中9組為實(shí)驗(yàn)組,1組為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組大鼠用2％戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉后,后肢剪毛備皮。將大鼠后肢置于伸膝、踝背屈90°位置,利用自制機(jī)械性打擊器,使500g擊錘以3m/s的速度一次性打擊大鼠右后肢距跟骨上2cm處,傷后肌肉仍保持完整,脛腓骨無(wú)骨折,不給予任何處理。挫傷后每只大鼠分籠飼養(yǎng)并給予消毒飼料及自來(lái)水飼養(yǎng),保持墊料清潔及空氣通暢。于損傷后3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、

5、10d和14d將大鼠乙醚麻醉后,脫頸椎致死,取右下肢骨骼肌。對(duì)照組大鼠后肢剪毛備皮后不致傷,取相同部位同等大小腓腸肌,以備HE染色、Masson染色和免疫熒光染色應(yīng)用。應(yīng)用免疫熒光染色方法檢測(cè)50例大鼠腓腸肌挫傷后各時(shí)間段CFCs的變化情況,以非挫傷組大鼠腓腸肌作對(duì)照,共聚焦顯微鏡x600倍下,在挫傷區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)視野,計(jì)數(shù)CFCs的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞率。用SPSS13.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析,以P＜0.05為

6、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 對(duì)照組大鼠骨骼肌中,未見(jiàn)雙重染色陽(yáng)性(CD45+/pColⅠ+)的CFCs分布。損傷組大鼠骨骼肌挫傷后6h～1d,僅見(jiàn)少數(shù)CD45陽(yáng)性的單個(gè)核細(xì)胞,而沒(méi)有CD45+/pColⅠ+的染色;傷后3d開(kāi)始有少量CFCs聚集于損傷區(qū):傷后5d,CFCs的數(shù)量明顯增加,傷后7d,CFCs的數(shù)量達(dá)高峰,此后數(shù)量逐漸減少;同時(shí)還發(fā)現(xiàn)相對(duì)于3d組,CFCs的細(xì)胞體積逐漸變大,細(xì)胞胞質(zhì)逐漸豐富,