小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α的表達(dá)及其與損傷時(shí)間的關(guān)系.pdf

1、目的：創(chuàng)傷愈合是一個(gè)包括損傷組織炎癥反應(yīng)，增生增殖和成熟階段的一個(gè)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)。許多不同種類的生物物質(zhì)與創(chuàng)傷愈合的各個(gè)階段比如促進(jìn)炎癥反應(yīng)，肉芽組織的生成以及血管反應(yīng)等密切相關(guān)。在法醫(yī)病理學(xué)中，這些生物物質(zhì)在皮膚損傷中的表達(dá)可以用于損傷時(shí)間的推測。趨化性細(xì)胞因子又稱趨化因子，它們參與白細(xì)胞遷移、激活和趨化，在炎癥反應(yīng)中起核心作用。MIP-1α屬趨化因子CC亞族，分子量為8KD。MIP-1α可在不同因素刺激下被細(xì)菌，病毒及IL-1、TN

2、F-α等炎性細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生，據(jù)報(bào)道細(xì)胞來源的MIP-1α可由單核/巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、及某些腫瘤細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生。MIP-1α的靶細(xì)胞有單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、酸性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等，其通過受體介導(dǎo)與靶細(xì)胞結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)活性.MIP-1α與其受體結(jié)合后，有趨化免疫細(xì)胞、抑制造血干細(xì)胞生長及抑制HIV感染的作用。目前國內(nèi)外對MIP-1α研究多集中在臨床領(lǐng)域，而在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究較少，尤其是國內(nèi)對MIP

3、-1α在皮膚機(jī)械性損傷修復(fù)時(shí)間的推斷方面幾乎未見報(bào)道。本研究通過建立小鼠皮膚切創(chuàng)損傷模型，運(yùn)用免疫組化技術(shù)及其陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)法對損傷組織進(jìn)行MIP-1α的檢測與分析，探討在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中其表達(dá)的時(shí)序性變化規(guī)律，以便為法醫(yī)病理學(xué)損傷時(shí)間的推斷提供一個(gè)新的理論依據(jù)。 方法：采用完全隨機(jī)分組方法，分為實(shí)驗(yàn)組和對照組。實(shí)驗(yàn)組又分為生前造創(chuàng)組和死后造創(chuàng)組，生前造創(chuàng)組根據(jù)造創(chuàng)后處死時(shí)間不同將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為傷后1h、3h、6h、12h、1

4、d、3d、6d、10d、14d共9組，死后造創(chuàng)組分為0.5h，1h，3h，6h共4組；另設(shè)一組為正常對照組，即未造創(chuàng)組。生前造創(chuàng)組在小鼠背部制做全層切創(chuàng)，在預(yù)定時(shí)間分別斷頸處死后即刻取材，死后造創(chuàng)組于處死小鼠后在預(yù)定時(shí)間造創(chuàng)取材，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)及陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察傷后小鼠切創(chuàng)組織中不同時(shí)程的生前傷和死后傷皮膚創(chuàng)傷局部MIP-1α的表達(dá)，并和無切創(chuàng)的小鼠作為對照，探討MIP-1α在小鼠皮膚切創(chuàng)損傷愈合過程中的表達(dá)分布變化規(guī)律及其與損

5、傷時(shí)間的關(guān)系。 結(jié)果：1、HE染色觀察：傷后1d內(nèi)，可見大量炎性細(xì)胞游出，主要以中性粒細(xì)胞浸潤為主；傷后3～6d，肉芽組織逐漸形成并大量增生，炎性細(xì)胞以單核-巨噬細(xì)胞為主；傷后10～14d，肉芽組織逐漸成熟，炎性細(xì)胞消失，創(chuàng)口基本愈合。死后造創(chuàng)組及正常對照組鏡下無上述改變。2、免疫組化SABC法染色觀察：傷后1d內(nèi)，MIP-1α在大量浸潤的中性粒細(xì)胞中呈陽性染色及在單核細(xì)胞中呈散在陽性表達(dá)；傷后3d，MIP-1α在逐漸形成并大量

6、增生的肉芽組織中呈陽性染色，其主要在大量的單核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并在開始增生的成纖維細(xì)胞內(nèi)表達(dá)；其后到14d MIP-1α陽性表達(dá)在部分成纖維細(xì)胞內(nèi)，但染色范圍和強(qiáng)度明顯減弱。死后造創(chuàng)組(0.5h，1h組)及正常對照組在部分表皮細(xì)胞及毛囊等表達(dá)弱陽性，死后造創(chuàng)3h,6h組表達(dá)陰性。3、陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)法結(jié)果：陽性細(xì)胞率(PR值)在傷后6h到傷后3d逐漸上升，傷后3d達(dá)到高峰，傷后10～14d，PR值逐漸下降。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果：方差分析結(jié)果表明生前

7、創(chuàng)傷各相鄰兩組之間：MIP-1α PR值相比均具有顯著差異(P＜0.01)。其中生前創(chuàng)傷3d組與其他各時(shí)間組相比均有顯著差異(P＜0.01)。 結(jié)論： 1、生前造創(chuàng)組MIP-1α在炎癥細(xì)胞中的表達(dá)量的變化具有規(guī)律性，呈現(xiàn)出升高期.高峰期.下降期的時(shí)序性變化曲線，其中造創(chuàng)后3d達(dá)到表達(dá)最高峰。2、MIP-1α表達(dá)陽性細(xì)胞的變化具有規(guī)律性，呈現(xiàn)出早期以中性粒細(xì)胞為主，高峰期以單核.巨噬細(xì)胞為主，后期以部分成纖維細(xì)胞表達(dá)為主的動(dòng)態(tài)變化