鈉尿肽受體A(NPR-A)在小鼠眼球發(fā)育過程中的表達(dá).pdf

1、NPR-A(natriuretic peptide receptor A，NPR-A)是鈉尿肽家族中的重要一員，其本身也是鳥苷酸環(huán)化酶耦聯(lián)受體，通過與鈉尿肽結(jié)合，升高細(xì)胞內(nèi)cGMP水平來介導(dǎo)鈉尿肽的生理學(xué)效應(yīng)。以往對于鈉尿肽系統(tǒng)的研究主要集中在心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，最近在眼中也發(fā)現(xiàn)有大量鈉尿肽的表達(dá)，并發(fā)揮著重要的作用。首先，視網(wǎng)膜作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，廣泛表達(dá)鈉尿肽，并且其在神經(jīng)信號的傳遞中發(fā)揮著重要的作用。其次，在眼中的其它

2、部位，如房水、睫狀體等也有廣泛的表達(dá)，并具有調(diào)節(jié)眼內(nèi)壓，控制青光眼等疾病的進(jìn)展功能。但目前對鈉尿肽及其受體在眼中的定位及作用仍存在很多爭議，尤其是在眼角膜和晶狀體內(nèi)的研究成果十分有限。此外，以往研究總是集中在成年眼球，對胚胎期眼的研究在國內(nèi)還尚未有系統(tǒng)的文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)試圖利用免疫組織化學(xué)法來檢測NPR-A在胚胎期至成年小鼠眼角膜、晶狀體和視網(wǎng)膜中的表達(dá)，并探討其在維持眼的發(fā)育和視覺形成中的重要意義，從而加深對鈉尿肽系統(tǒng)的了解，也為視網(wǎng)

3、膜疾病的治療提供新的資料！
　　目的:檢測NPR-A在各年齡點(diǎn)小鼠角膜、晶狀體以及視網(wǎng)膜中的表達(dá)，并探討以下三個(gè)方面的內(nèi)容:①NPR-A在角膜發(fā)育，以及對維持角膜上皮細(xì)胞修復(fù)中的重要意義。②NPR-A在晶狀體發(fā)育、晶狀體上皮細(xì)胞的增殖以及晶狀體的通透性中的重要調(diào)節(jié)功能。③NPR-A在視網(wǎng)膜神經(jīng)元發(fā)育及維持Müller細(xì)胞的功能活動(dòng)中的重要調(diào)節(jié)作用。
　　方法:本課題應(yīng)用石蠟切片免疫組織化學(xué)染色、墨汁灌流、鋪片免疫熒光染色等技

4、術(shù)對胚胎期和出生后小鼠角膜、晶狀體、視網(wǎng)膜進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并對視網(wǎng)膜NPR-A陽性細(xì)胞突起的密度進(jìn)行測量。
　　結(jié)果:1.NPR-A在角膜中的表達(dá)
　　在胚胎期，NPR-A開始出現(xiàn)小鼠角膜上皮細(xì)胞中，并持續(xù)高表達(dá)至成年，而角膜基質(zhì)層的纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)隨年齡的增長而逐漸減弱。在E16，NPR-A開始表達(dá)在角膜上皮細(xì)胞中，出生后進(jìn)一步增強(qiáng)，P14達(dá)到高峰，之后持續(xù)高表達(dá)。另外，NPR-A也于El6在角膜基質(zhì)和內(nèi)皮細(xì)胞開

5、始表達(dá)，P5時(shí)NPR-A表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，且廣泛的分布在成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中。P14之后，NPR-A的表達(dá)卻顯著減少，僅稀疏的分散在纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的表面。
　　2.NPR-A在晶狀體內(nèi)的表達(dá)
　　從P0開始NPR-A開始高表達(dá)在晶狀體前囊上皮細(xì)胞膜上，隨著日齡增加，中部上皮細(xì)胞NPR-A表達(dá)減弱，至P90，免疫陽性細(xì)胞主要集中在赤道附近的上皮細(xì)胞膜中。此外，NPR-A也高表達(dá)于由后上皮細(xì)胞生成的初級纖維中，在El6開始出

6、現(xiàn)，P0，大量表達(dá)在初級纖維細(xì)胞上。但在P7以后，NPR-A從中心向外周逐漸減少，至P90消失。同時(shí)NPR-A陽性纖維細(xì)胞形態(tài)也發(fā)生著改變，P0，纖維細(xì)胞圍繞前極呈現(xiàn)較大、不規(guī)則的多邊形結(jié)構(gòu)，P3，周圍細(xì)胞體逐漸增大、延長成梭形，P7，胞體變狹長呈絲狀，并以同心圓結(jié)構(gòu)排列。
　　3.NPR-A在視網(wǎng)膜中的表達(dá)
　　NPR-A廣泛存在于視網(wǎng)膜神經(jīng)元中。例如，在外核層，NPR-A于P7開始高表達(dá)在視錐、視桿細(xì)胞內(nèi)、外側(cè)突起上，在

7、P14減弱，P30之后，持續(xù)穩(wěn)定弱表達(dá)。在內(nèi)核層，從P7開始NPR-A持續(xù)弱表達(dá)于雙極細(xì)胞的突起中，而在水平細(xì)胞中未見NPR-A表達(dá)。在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，NPR-A于El6開始高表達(dá)在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞體中，P14時(shí)明顯減弱，而在神經(jīng)纖維層，NPR-A從胚胎期至成年持續(xù)高表達(dá)在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突中。在外網(wǎng)狀層和內(nèi)網(wǎng)狀層，NPR-A于P14均高表達(dá)，但于P30之后逐漸減弱。此外，NPR-A還廣泛的存在于Müller的終足和外側(cè)突起中，并持續(xù)至成年。<