小鼠胚胎早期發(fā)育過程中Xist基因的轉錄模式.pdf

1、雌性動物的劑量補償效應是通過細胞中一條X染色體的轉錄失活來實現(xiàn)的.失活的染色體上面往往發(fā)生一系列的修飾,導致產生非常穩(wěn)定的異染色質且能在細胞復制的過程中穩(wěn)定遺傳.X染色體失活與位于"X染色體失活中心"(XIC)上Xist基因息息相關,主要表現(xiàn)在Xist的轉錄產物通過包圍一條X染色體使其沉默.由于其在X染色體失活中的重要作用,對Xist的研究一直是近幾年的研究熱點.其中很重要的一點就是試圖建立Xist染色體在發(fā)育過程中的時空轉錄模式.但是

2、由于胚胎發(fā)育早期Xist轉錄本數量的稀少而難以達到很好的效果.該實驗采用巢氏RT-PCR方法,對來自體外培養(yǎng)的處于各個發(fā)育時期的小鼠胚胎進行了分析和性別鑒定.首先提取了6周齡昆明白小鼠幾個組織的RNA,用普通反轉錄法擴增Xist和Sry以確定RT-PCR的條件,Sry的主要作用是用來做性別鑒定.最終將其反應條件確定為退火溫度55℃,Sry和Xist可以置于同一體系中擴增.然后利用實驗一確定的PCR條件,以Hprt為陽性對照,用巢式RT-

3、PCR對小鼠早期胚胎進行Xist基因的轉錄分析,結果發(fā)現(xiàn),轉錄Sry基因的睪丸組織以及雄性胚胎,從受精卵發(fā)育到囊胚的過程中,基本上不轉錄Xist基因;不轉錄Sry基因的雌性卵母細胞和雌性胚胎,從出現(xiàn)原核開始,到發(fā)育至2-細胞期的過程中,Xist基因一直不轉錄,但是,從4-細胞期開始,一直到孵化前囊胚階段,雌性胚胎都轉錄Xist基因.實驗結果說明,X染色體的失活最早出現(xiàn)在胚胎發(fā)育的4-細胞階段.同時由于從原核時期擴增到了Sry,該文認為胚