Pyk2在小鼠卵子受精及早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的定位研究.pdf

1、Pyk2是一種非受體酪氨酸激酶，屬于粘著斑家族中的成員，與FAK有密切關(guān)系，是一種進(jìn)化上非常保守的蛋白質(zhì)。Pyk2在不同的細(xì)胞中與不同的分子相互作用，從而發(fā)揮不同的作用。目前，對(duì)于Pyk2的研究主要集中在體細(xì)胞中，并且在體細(xì)胞中的功能具有多樣性；它可以感受包括細(xì)胞外基質(zhì)在內(nèi)的多種物理和化學(xué)的細(xì)胞外信號(hào)而激活，參與胞內(nèi)信號(hào)傳遞，從而在細(xì)胞粘附、遷移、生存、增殖、凋亡等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。但Pyk2在生殖細(xì)胞中的功能研究很少。
　　本

2、實(shí)驗(yàn)室曾研究了Pyk2在大鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟過(guò)程中的定位及功能，發(fā)現(xiàn)Pyk2可能通過(guò)調(diào)節(jié)微絲的聚合與組裝在大鼠卵母細(xì)胞極性的建立、第一極體排出過(guò)程中發(fā)揮重要作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，Pyk2參與癌細(xì)胞的增殖和遷移，成為目前癌癥治療的靶點(diǎn)。哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育過(guò)程的細(xì)胞分裂類(lèi)似癌細(xì)胞的增殖，因此，Pyk2可能也在這一過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但是，目前未見(jiàn)相關(guān)研究和報(bào)道。
　　本研究應(yīng)用蛋白印跡、共聚焦顯微術(shù)、抑制劑干擾等方法對(duì)Pyk2在成

3、熟卵子中的表達(dá)和其在小鼠卵子受精及早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的定位進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步了解其功能奠定基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)在小鼠卵母細(xì)胞受精過(guò)程中，無(wú)論是體內(nèi)受精還是體外受精取出的受精卵，Pyk2除了均勻分布在細(xì)胞質(zhì)中外，還特異性地聚集在精子頭部及形成的雌雄原核中；在小鼠體內(nèi)取出和體外培養(yǎng)的早期胚胎中，Pyk2均勻地分布在細(xì)胞質(zhì)中，此外還特異性地聚集在細(xì)胞核除核仁之外的區(qū)域，包括分散在核中的染色質(zhì)上，也可見(jiàn)Pyk2的分布。在分裂期的卵裂球中，染色質(zhì)凝集

4、為染色體，此時(shí)Pyk2也呈點(diǎn)狀分布在染色體上。從體內(nèi)取出的較晚期的囊胚中，Pyk2在細(xì)胞核中消失，主要分布在細(xì)胞與細(xì)胞的連接處，只有少數(shù)細(xì)胞中，還可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)中有Pyk2的表達(dá)。而較多的Pyk2聚集在囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞外的空隙中。另外，我們進(jìn)一步研究了第402位酪氨酸磷酸化的Pyk2（P-Pyk2）在小鼠早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的定位分布情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)的早期胚胎發(fā)育過(guò)程中幾乎檢測(cè)不到P-Pyk2的分布，只有在早期胚胎3-細(xì)胞、4-細(xì)胞和桑葚胚

5、中有少量的Pyk2被活化，并呈星點(diǎn)狀分布在細(xì)胞質(zhì)中。而在體外培養(yǎng)的早期胚胎中只有在2-細(xì)胞胚胎中檢測(cè)到較明顯的P-Pyk2分布，而且只分布在細(xì)胞與細(xì)胞的接觸處；4-細(xì)胞、桑葚胚和早期囊胚中，可見(jiàn)少量P-Pyk2呈星點(diǎn)狀分布在胞質(zhì)中。
　　為了研究Pyk2可能具有的功能，用不同濃度（2.5μmol/L、1.25μmol/L、1μmol/L、0.8μmol/L、0.625μmol/L）的酪氨酸激酶抑制劑Tyrphostin A9處理體

6、外培養(yǎng)的受精卵，發(fā)現(xiàn)Tyrphostin A9能夠抑制受精卵的卵裂，但是這種抑制并不是呈濃度依賴(lài)性，而是呈現(xiàn)全或無(wú)的特征，既當(dāng)抑制劑濃度大于1μmol/L時(shí)，卵裂即被抑制，而當(dāng)抑制劑濃度小于0.8μmol/L時(shí)，雖然其卵裂率與對(duì)照組之間呈顯著性差異，但大部分受精卵的卵裂則不受影響。另外，通過(guò)檢測(cè)抑制的受精卵在Pyk2的分布變化，發(fā)現(xiàn)Pyk2表達(dá)明顯上升。令人吃驚的是，Tyrphostin A9不僅沒(méi)有抑制Pyk2的磷酸化，反而顯著增加了