RNAi下調(diào)Pyk2表達對小鼠早期胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、Pyk2是非受體酪氨酸激酶的一種,屬于黏著斑家族,是在進化上非常保守的蛋白質(zhì)。Pyk2的活化需要磷酸化,Pyk2的磷酸化包括自我磷酸化和被動磷酸化,這對Pyk2的激活和功能的發(fā)揮有著極其重要作用。對于Pyk2的研究,目前主要集中于體細胞中,并發(fā)現(xiàn)其功能具有多樣性;活化后的Pyk2參與多種細胞信號的傳導(dǎo),因此對細胞的增殖、凋亡、粘附、遷移等過程發(fā)揮著極其重要的作用。Pyk2在生殖方面的研究還不多見。目前多項研究發(fā)現(xiàn),Pyk2參與一些腫瘤細

2、胞的遷移和增殖的過程,由于早期胚胎細胞遷移與增殖的過程與腫瘤細胞類似,因此Pyk2在早期胚胎發(fā)育過程中可能發(fā)揮著重要作用,但是類似的研究鮮有報道。另外本實驗室已經(jīng)發(fā)現(xiàn),在早期胚胎發(fā)育過程中未活化的Pyk2蛋白在細胞中大量存在,而且大量聚集在細胞核當中,因此本研究利用實時熒光PCR、免疫細胞化學(xué)以及RNA干擾等方法研究磷酸化的Pyk2在小鼠受精作用以及早期胚胎發(fā)育過程中扮演的角色,為進一步研究奠定基礎(chǔ)。
　　研究發(fā)現(xiàn)在小鼠卵母細胞體

3、內(nèi)受精過程中P-Pyk2除了均勻分布于細胞質(zhì)中外,還特異性的在雌雄原核中聚集,并在形成原核過程中慢慢聚集。在小鼠體內(nèi)受精早期胚胎發(fā)育的研究發(fā)現(xiàn),在胚胎發(fā)育的到8-細胞之前,P-Pyk2在細胞質(zhì)中均勻地分布,在細胞核中大量的聚集,并且環(huán)繞在核仁周圍。當卵裂球處于分裂期時,P-Pyk2環(huán)繞分布于染色體周圍。隨著胚胎發(fā)育的進行,p-Pyk2在細胞核中聚集逐漸消失,當發(fā)育到囊胚期時,在核中已經(jīng)監(jiān)測不到P-Pyk2的分布,但是P-Pyk2主要聚集

4、在囊胚滋養(yǎng)層細胞皮質(zhì)中。
　　我們研究Pyk2在胚胎中的表達量后發(fā)現(xiàn),受精卵發(fā)育到2-細胞時,Pyk2的表達量先是下降,到4-細胞時又升高,這可能是當合子基因開始轉(zhuǎn)錄引起的。為了進一步探究Pyk2對于小鼠早期胚胎發(fā)育的影響,我們利用RNA干擾的方法下調(diào)Pyk2的表達。注射Pyk2siRNA的胚胎與對照組相比,在體外發(fā)育過程中存在較明顯的差異,Pyk2下調(diào)后,2-細胞率,4-細胞率以及8-細胞率都不同程度的下降,這說明,Pyk2在早