鎘對小鼠卵母細胞成熟和早期胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、近年來，鎘的毒性研究一直受到人們的廣泛關注。機體攝入過量的鎘可以引起多種器官和組織細胞的損傷，除主要危害肝臟、腎臟和骨骼外，對生殖系統(tǒng)也會造成損傷，例如危害精子的發(fā)生，改變卵巢的形態(tài)結構，抑制卵泡的生長與發(fā)育等。但是，環(huán)境鎘暴露對卵母細胞以及后代的危害尚不完全清楚。飲用含鎘量過高的水是機體攝入過量鎘的一種主要方式。本研究以ICR小鼠連續(xù)35天自由飲用含鎘水（64 mg/L的CdCl2·2.5 H2O）復制動物模型，研究鎘對小鼠卵母細胞成

2、熟以及早期胚胎發(fā)育的影響。
　　1.鎘對小鼠卵母細胞成熟的影響
　　為了消除自來水中鎘的影響，對照組雌鼠飲用Milli-Q超純水，實驗組雌鼠飲用Milli-Q水配置的含鎘水。通過超數排卵實驗，檢測卵泡的發(fā)育和成熟，體內和體外實驗檢測卵母細胞的成熟情況，應用免疫熒光方法檢測卵母細胞成熟過程中染色體、紡錘體、肌動蛋白帽、線粒體的形態(tài)和功能，并檢測卵母細胞內ATP含量的變化;通過檢測卵母細胞內組蛋白H3K9甲基化和H4K12乙?；?/p>

3、水平來反應鎘對表觀遺傳修飾的影響。
　　結果表明，鎘處理導致雌性小鼠超排后卵母細胞數量的顯著減少(p＜0.05);體內和體外實驗均表明，鎘處理后卵母細胞生發(fā)泡破裂(GVBD)無變化，但是大部分卵母細胞停滯在第一次減數分裂中期（MⅠ期），與對照組相比，成熟卵母細胞(MⅡ)所占比例顯著下降，說明鎘處理不會抑制卵母細胞減數分裂的恢復，但干擾了第一次減數分裂的正常完成。免疫熒光顯示，鎘處理導致MⅡ期卵母細胞染色體、紡錘體和細胞極性的異常，

4、鎘處理后MⅡ期卵母細胞的染色體并未整齊排列，紡錘體形態(tài)沒有呈現(xiàn)典型的梭形，同時Actincap出現(xiàn)丟失，說明鎘處理導致MⅡ期卵母細胞的質量出現(xiàn)下降。進一步檢測了線粒體的數量和功能，結果表明，鎘處理導致MⅡ期卵母細胞中線粒體數目出現(xiàn)顯著下降，雖然線粒體功能得到了增強，但卻未能挽救ATP含量的下降。組蛋白修飾的檢測結果顯示，鎘處理顯著增強了MⅡ期卵母細胞H3K9的甲基化水平和H4K12的乙?；健Ｍㄟ^孤雌激活實驗來觀察鎘對卵母細胞第二次減

5、數分裂的影響，結果顯示，雖然鎘處理延緩了第二極體的排出和原核的形成，但并未改變最終形成原核的數目，說明鎘處理并未顯著影響第二次減數分裂的最終完成。
　　2.鎘對小鼠早期胚胎發(fā)育的影響
　　將鎘處理的雌鼠與正常雄鼠交配后，采集受精卵進行體外培養(yǎng)，以觀察鎘對早期胚胎發(fā)育的影響;結果顯示，鎘處理顯著降低了同一時期4細胞胚胎和囊胚的發(fā)育率。在進一步的實驗中，采集鎘處理雌鼠的卵母細胞進行體外受精，與對照組相比，囊胚發(fā)育率同樣下降。這說