E-cadherin表達(dá)和AKT磷酸化水平與宮頸病變程度的相關(guān)性分析.pdf

1、研究背景:
　　宮頸癌是常見的婦科腫瘤,近年來我國每年新增宮頸癌患者13萬余人,約占世界新增病例總數(shù)的28.8％,并逐漸趨于年輕化。若早期被活檢證實(shí),大多數(shù)腫瘤可以完整切除,可以大大降低宮頸癌患者的死亡率及復(fù)發(fā)率。宮頸癌是一個緩慢進(jìn)展的連續(xù)過程,與患者宮頸人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染、人流次數(shù)、性伴侶、初次性交年齡、宮頸腫瘤家族史、產(chǎn)次、地理分布等多種高危因素具有明顯相關(guān)性,約99.7%的宮

2、頸癌均可見 HPV感染,HPV感染已成為宮頸癌的最主要病因。在這一過程中,常常伴隨有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)現(xiàn)象發(fā)生。
　　EMT多指上皮細(xì)胞在某些特定因子的作用下,細(xì)胞連接解體、細(xì)胞極性逐漸喪失、細(xì)胞骨架重構(gòu),從而使上皮細(xì)胞的極性喪失,遷移和運(yùn)動能力增強(qiáng),同時上皮表型丟失而逐漸獲得間質(zhì)表型。E-cadherin是粘附分子中鈣離子依賴的細(xì)胞粘附素家族中的一員,在正常

3、上皮的表型的維持中起了關(guān)鍵作用,它的減少或丟失是EMT最重要的標(biāo)志性變化。AKT是PI3K下游最重要的信號分子,它是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶,活化的p-AKT通過AKT/GSK-3β/Snail通路誘導(dǎo)EMT的發(fā)生,上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化,促進(jìn)惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　子宮頸癌的發(fā)生是一個漸進(jìn)的過程,由子宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasm,CIN),經(jīng)過CIN1、2、3的漸進(jìn)性,逐步發(fā)展形成

4、宮頸癌。期間,EMT的發(fā)生與宮頸病變程度及其可能的信號傳導(dǎo)分子還不是很清楚。因此,我們收集不同病變級別的宮頸組織標(biāo)本,分析宮頸組織中E-cadherin表達(dá)及 AKT磷酸化水平的動態(tài)變化與宮頸病變程度之間的關(guān)系,結(jié)合相關(guān)信號分子及宮頸上皮分化指標(biāo)的檢測,進(jìn)一步探討其可能的分子學(xué)機(jī)制,為完善宮頸癌發(fā)病機(jī)制及臨床診治提供實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。
　　目的:分析 E-cadherin表達(dá)和AKT磷酸化水平與宮頸病變程度的相關(guān)性,探討EMT與疾病進(jìn)展

5、的關(guān)系及其可能的信號通路。
　　方法:收集20例正常宮頸組織、30例CIN組織、50例宮頸鱗癌組織,采用實(shí)時熒光定量PCR、免疫組化和WB分別檢測組織中E-cadherin、β-catenin和Loricrin的mRNA及蛋白表達(dá)情況,同時檢測不同級別病變組織中AKT磷酸化程度的變化;分析E-cadherin表達(dá)和AKT磷酸化水平的相關(guān)性,及它們與子宮頸病變程度和宮頸鱗癌分化程度的相關(guān)性。
　　結(jié)果:(1)免疫組化結(jié)果顯示,

6、隨著宮頸病變的進(jìn)展,E-cadherin、Loricrin的表達(dá)逐漸降低,甚至缺失(P<0.05);在正常宮頸上皮β-catenin表達(dá)于胞膜,隨著宮頸病變的進(jìn)展,逐漸由胞膜向胞漿和胞核轉(zhuǎn)移,且表達(dá)陽性率逐漸降低(P<0.05);p-AKT的表達(dá)則隨病變進(jìn)展而逐漸升高(P<0.05)。
　　(2)WB結(jié)果顯示,隨著宮頸病變的進(jìn)展,E-cadherin、Loricrin、β-catenin的表達(dá)逐漸降低,甚至缺失(P<0.05);p

7、-AKT的表達(dá)則隨病變進(jìn)展而逐漸升高(P<0.05),與免疫組化結(jié)果一致。
　　(3)定量PCR結(jié)果亦證實(shí),隨著宮頸病變的進(jìn)展,E-cadherin、Loricrin、β-catenin的mRNA表達(dá)水平逐漸降低,與蛋白表達(dá)結(jié)果一致(P值均<0.05)。
　　(4)在宮頸癌中,免疫組化和WB結(jié)果顯示,隨著腫瘤組織分化程度的降低,E-cadherin、Loricrin、β-catenin的表達(dá)逐漸降低,甚至缺失(P<0.05)

8、,而AKT的磷酸化水平則呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(P<0.05)。
　　(5)相關(guān)分析顯示,E-cadherin的表達(dá)與宮頸病變的程度呈負(fù)相關(guān)(rs=-.688,P<0.01),而p-AKT的表達(dá)則呈正相關(guān)(rs=.462,P<0.01)。E-cadherin的表達(dá)與鱗癌的分化程度呈正相關(guān)(rs=.438,P<0.01)而p-AKT的表達(dá)則呈負(fù)相關(guān)(rs=-.692,P<0.01)。
　　(7)E-cadherin表達(dá)與AKT磷酸