膠原蛋白抗氧化與延緩皮膚衰老作用研究.pdf

1、膠原蛋白是一類結(jié)構(gòu)獨特的蛋白質(zhì)，在延緩皮膚衰老中的應(yīng)用廣泛，歷史悠久，形式多樣。但目前，人們對其研究仍主要集中在分離提取以及理化特性方面，而關(guān)于其抗氧化活性、延緩皮膚功效的的報道十分有限，結(jié)論有所差異。本文以尼羅羅非魚膠原蛋白為原料，研究了膠原蛋白的抗氧化活性、延緩皮膚衰老功效及其生物利用率和利用形式，為膠原蛋白在延緩皮膚衰老中的應(yīng)用提供一定的實驗證據(jù)和理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　(1)利用體外模擬胃腸道消化模型，研究

2、了膠原蛋白的消化動態(tài)和抗氧化活性。膠原蛋白從冒進入小腸后，其水解度從1.15％增加到了16.74％;疏水性卻從21.46％降低到了2.06％; DPPH自由基的清除率從18.22％增加到了31.79％;亞油酸自氧化抑制率在40 min時達到了34.63％，而后趨于穩(wěn)定。然后利用超濾技術(shù)，將膠原蛋白的消化產(chǎn)物分離得到了三個組分，其中平均分子量最小(436.80Da)的組分得率(86.70％)和抗氧化活性最高。該組分依次經(jīng)過Toyopear

3、lSP-650M、Sephadex G10、Eclipse XDB C18柱純化得到了一種高抗氧化活性肽，經(jīng)UPLC-ESI-MS鑒定為Gly-Pro-Met(303.38 Da)，其IC50值為25.64μg/mL。
　　(2)利用D-半乳糖致亞急性衰老小鼠模型，研究了膠原蛋白灌胃延緩皮膚衰老的功效。膠原蛋白(2000 mg/kg.d)灌胃8周后，小鼠（胸腺、脾臟、肝臟）臟器指數(shù)，皮膚和血清抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性均

4、顯著增加(p＜0.05);皮膚膠原蛋白含量顯著提高，MDA含量顯著降低(p＜0.05);皮膚組織形態(tài)、膠原纖維、彈性纖維的形態(tài)和數(shù)量明顯改善。
　　(3)通過SD大鼠灌胃試驗，利用藥動學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)研究了膠原蛋白的生物利用率和利用形式。膠原蛋白(4000 mg/kg)灌胃后，血漿中Hyp含量快速增加，在2.33 h才達到峰值（59.47μg/mL），在24 h的保留量為14.65％，相對和絕對生物利用率分別為48.58％、65.

5、57％;血漿中所有游離和結(jié)合氨基酸均明顯增加，且血漿中各種氨基酸的增加量與膠原蛋白中的含量呈正比;最后利用UPLC-ESI-MS技術(shù)，從血漿中鑒定出了16種主要的膠原多肽，分別是:Glu-Asp、Glu-Met、 Glu-Asn、Tyr-Met、Asp-Glu、Gly-Ser-Pro、Pro-Gly-Hyp、Ser-Ser、Ala-Ala-His、Pro-Hyp、Ala-Asn、Ser-Gly-Met、Glu-Trp-Leu、Phe-G