補益營衛(wèi)延緩皮膚衰老的理論和實驗研究.pdf

1、皮膚衰老是人體最常見的衰老現(xiàn)象。一般分為時序衰老和光老化。時序衰老多表現(xiàn)為細小皺紋、皮膚松弛、干燥和粗糙。光老化多表現(xiàn)為彈性喪失、皺紋粗深、皮革樣外觀、常伴有色素沉著。中醫(yī)藥在延緩皮膚衰老中有明顯的優(yōu)勢。中醫(yī)理論認為皮膚衰老與脾胃、營衛(wèi)關系密切。本文從文獻研究方面探討皮膚衰老、脾胃與營衛(wèi)之間的關系，為健脾胃、補營衛(wèi)延緩皮膚衰老提供理論依據(jù)；實驗研究以具有健脾胃、補營衛(wèi)作用的藥物組方，探討其延緩皮膚衰老的現(xiàn)代醫(yī)學機制，為健脾胃以補益營衛(wèi)延

2、緩皮膚衰老提供實驗依據(jù)。 1 文獻研究 本部分主要回顧了中醫(yī)皮膚衰老理論的發(fā)展源流、脾胃在衰老與皮膚衰老中的作用、營衛(wèi)與衰老和皮膚衰老的關系。 中醫(yī)皮膚衰老理論是與中醫(yī)衰老理論的發(fā)展一脈相承，萌芽于春秋之前，形成于漢唐，充實于宋元明清，發(fā)展于當代。 張仲景《傷寒雜病論》益營衛(wèi)重視脾胃，并且《傷寒論》中明確論述了營衛(wèi)與皮膚衰老之間的關系。 脾胃，主運化腐熟水谷精微和運行水液，為氣血生化之源、后天之本

3、。脾胃居于中焦，為氣機升降的樞紐，氣的升降出入均賴脾胃的功能正常。脾胃常受到飲食規(guī)律、個人口味、生活方式和情志的影響而容易出現(xiàn)功能失常，導致氣血生化不足，營衛(wèi)乏源，誘導皮膚衰老的進展。脾胃功能的失常，又容易導致瘀血、痰濁等病理產(chǎn)物的累積，從而加重皮膚衰老。 營衛(wèi)化源于中焦，布達于皮膚，具有營養(yǎng)、保護皮膚，司皮膚感覺，調節(jié)汗液排泄的作用，與皮膚的生理病理有十分密切的關系。通常情況下，營行脈中，衛(wèi)行脈外，兩者常常通過經(jīng)絡腧穴、絡脈、

4、玄府和腠理相互交匯，達到陰平陽秘的穩(wěn)態(tài)。營衛(wèi)運行還具有節(jié)律性。營衛(wèi)失常是皮膚衰老的基本病理因素。 2 實驗研究 2.1 目的通過觀察補益營衛(wèi)的抗氧化作用和對衰老皮膚膠原的影響，探討補益營衛(wèi)延緩皮膚衰老的深層次機制。 2.2 方法 120只小鼠隨機分為六組，一組設為正常組，常規(guī)攝食、光照。其它五組利用D-半乳糖120mg/1(g·d<'-1>皮下注射制造小鼠皮膚衰老模型。其中一組為模型組，每日皮下注射生理鹽

5、水，常規(guī)攝食、光照；一組設為對照組，維生素E50mg/kg·d<'-1>每日灌胃；其它三組以8g/kg·d<'-1>、4g/kg·d<'-1>、2g/kg·d<'-1>劑量給與補益營衛(wèi)煎劑，連續(xù)六周。最后腹主動脈取血，分離血清，利用試劑盒測定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、透明質酸含量；沉淀紅細胞，洗滌，利用試劑盒測定Na<'+>，K<'+>-ATP酶活力。取背部脫毛皮膚，制作10％勻漿，利用試劑盒測定SOD活性、M

6、DA含量和蛋白濃度；稱取適量脫毛皮膚，利用試劑盒測定羥脯氨酸含量。取頸部皮膚4％多聚甲醛固定、石蠟包埋、HE染色，光鏡下觀察組織病理學改變。另外，5μm切片，利用免疫組織化學方法和圖像分析系統(tǒng)評價轉化生長因子β1(TGF-β1)、結締組織生長因子(CTGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、基質金屬蛋白酶(MMP)MMP-1和MMP-9、基質金屬蛋白酶抑制物(TIMPs)TIMP-1和2、組織性纖溶酶原激活物(t-PA)和組織性纖溶

7、酶原激活物抑制物-1(PAI-1)在衰老皮膚的表達。 2.3 結果 小鼠皮下注射D-半乳糖(120mg/kg·d<'-1>)六周后，模型組血清中MDA含量顯著增加，SOD活力降低，與各組相比有顯著統(tǒng)計學意義。給與補益營衛(wèi)后可降低血清中的脂質過氧化產(chǎn)物MDA，高劑量組優(yōu)于陽性對照組(P<0.05)、低劑量組(P<0.001)及正常組(P<0.05)；補益營衛(wèi)可提高血中SOD活力，中、低劑量組SOD活力與正常組相當，與模型組

8、比較有顯著性差異(P<0.05)；高劑量組SOD活力優(yōu)于陽性組(P<0.05)。 造模后，模型組皮膚中MDA含量顯著增加，明顯高于其它組別：SOD活力降低。灌服補益營衛(wèi)后可降低自由基代謝產(chǎn)物MDA含量，高劑量組優(yōu)于陽性對照組(P<0.05)、低劑量組(P<0.05)及正常組(P<0.01)；補益營衛(wèi)可提高皮膚中SOD活力，中、低劑量組SOD活力與正常組相當，與模型組比較有顯著性差異(P<0.05)，高劑量組SOD活力優(yōu)于陽性組(

9、P<0.05)，且SOD活力高于正常組。 造模后，小鼠皮膚蛋白降低，與其它各組相比有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。補益營衛(wèi)后，高、中及低劑量組蛋白含量增加明顯，均高于正常組，其中高劑量組與對照組和低劑量組比較統(tǒng)計學意義顯著(P<0.05)。小鼠皮下注射D-半乳糖后，皮膚羥脯氨酸含量下降，與各組相比有顯著性差異(P<0.05或P<0.001)。補益營衛(wèi)后，可顯著提高皮膚羥脯氨酸水平，低劑量組羥脯氨酸

10、水平與正常組相當，高、中劑量組羥脯氨酸水平與正常組相比P<0.00l，高、中劑量組羥脯氨酸水平均優(yōu)于陽性對照組(P<0.001和P<0.05)，高劑量組羥脯氨酸水平優(yōu)于低劑量組(P<0.05)。 造模后，紅細胞Na<'+>，K<'+>-ATP酶活力下降，與各組相比有顯著性差異(P<0.05或P<0.001)。補益營衛(wèi)后，可顯著提高紅細胞Na<'+>，K<'+>-ATP酶水平，中、低劑量組紅細胞Na<'+>，K<'+>-ATP 酶

11、水平與正常組相當，高劑量組紅細胞Na<'+>，K<'+>-ATP酶水平與正常組相比P<0.00l，高劑量組紅細胞Na<'+>，K<'+>-ATP酶水平優(yōu)于陽性對照組(P<0.05)和低劑量組(P<0.001)。血清透明質酸含量經(jīng)方差分析，各組方差不齊，用秩和檢驗，各組秩次間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 與正常組小鼠皮膚相比，模型組小鼠皮膚結構可辨，表皮與真皮界線尚可分，表皮欠規(guī)則；真皮顯著變薄，染色較深，細胞層數(shù)減少；皮下脂肪

12、豐富；毛囊、皮脂腺欠完整。給與補益營衛(wèi)及維生素E后，小鼠皮膚結構完整，表皮與真皮界線清晰，表皮規(guī)則，真皮層較厚，染色較正常組均勻致密，細胞層數(shù)增多；基底膜可見，皮下脂肪少。 造模后bFGF表達水平顯著降低，與正常組相比有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。補益營衛(wèi)后，高劑量組bFGF水平顯著增加，與正常組，模型組、VE組、低劑量組相比均有顯著性差異，分別為p<0.05，p<0.001，p<0.05和，p<0.05。中、低劑量組、VE組均

13、使下降的bFGF基本回升至正常水平，高劑量組蛋白表達含量與陽性相比增加，有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。造模后TGF-β1表達水平顯著降低，與正常組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；補益營衛(wèi)高、中、低三個劑量組均可顯著增加TGF-β1水平，與模型組相比有顯著性差異，其中高與中、低劑量組之間有顯著性差異。VE可使降低的TGF-β1升高，與模型組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。造模后CTGF表達水平顯著增強，與正常組、補益營衛(wèi)處理組相比有統(tǒng)

14、計學意義(p<0.05)；經(jīng)補益營衛(wèi)處理后，CTGF水平與正常組水平相當，高、中、低三個劑量組之間沒有明顯差異(p>0.05)。給與VE后，CTGF的表達在毛囊等處顯著增加，與各組相比均有顯著性差異。 造模后MMP-1表達水平明顯增加，與正常組相比有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.05)；給與補益營衛(wèi)后高、中、低三個劑量組后MMP-1水平略有升高，但與模型組相比沒有統(tǒng)計學差異(p>0.05)，三個劑量組之間也沒有明顯差異(p>0.05)

15、。給與VE后增加的MMP-1降低，與模型組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，并且與補益營衛(wèi)三個劑量相比，其活性水平較低，與補益營衛(wèi)高劑量組相比有顯著統(tǒng)計學差異(P<0.01)。造模后MMP-9表達水平顯著降低，與正常組相比有顯著統(tǒng)計學差異(P<0.05)；補益營衛(wèi)后，MMP-9表達水平明顯升高，與模型組相比有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。補益營衛(wèi)高、中、低三個劑量組之間沒有明顯差異(p>0.05)。給與VE后，MMP-9

16、表達明顯增加，與模型組相比有顯著性統(tǒng)計學差異(P<0.05)。 造模后TIMP-1表達水平明顯降低，與各組相比有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.01)；補益營衛(wèi)高、中、低三個劑量組均增加TIMP-1水平，與模型組相比有顯著性差異，但是三個劑量組之間沒有明顯差異(p>0.05)。vE可使增加的FIMP-1降低，與模型組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。造模后TIMP-2表達水平增加，與各組相比有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.05)；補益營衛(wèi)后，

17、TIMP-2水平降低至與正常組水平相當，高、中、低三個劑量組之間沒有明顯差異(p>0.05)。給與VE后，TIMP-2的表達顯著降低。 造模后tPA表達水平明顯增加，與各組相比有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.01)；補益營衛(wèi)高、中、低三個劑量組均降低tPA水平，與模型組相比有顯著性差異，但是三個劑量組之間沒有明顯差異(p>0.05)。VE可使增加的tPA降低，與模型組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。造模后PAI-1表達水平變化不大，