鹿骨膠原蛋白的制備及抗氧化活性研究.pdf

1、本文以馬鹿鹿腿骨為原料，制備出鹿骨膠原蛋白，對(duì)膠原蛋白的相關(guān)特性進(jìn)行研究，并對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行研究。
　?。?）以新鮮馬鹿鹿腿骨為原料，采用雙酶酶解法制備鹿骨粉；通過(guò)單因素試驗(yàn)并正交優(yōu)化確定出鹿骨雙酶法酶解的最佳工藝條件，最佳工藝條件為：堿性蛋白酶在pH9.0、溫度50℃的條件下水解時(shí)間為3h，再在pH8.0、溫度37℃條件下，加入胰蛋白酶水解2h，此時(shí)的水解度為12.72％，分別是堿性蛋白酶和胰蛋白酶最大水解度的1.84倍和1.

2、39倍。
　?。?）采用酸法加酶法的提取工藝制備鹿骨膠原蛋白，用0.5mol/L的冰醋酸及6000U/g的胃蛋白酶在4℃條件下進(jìn)行水解提取，在單因素試驗(yàn)的結(jié)果基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)優(yōu)化鹿骨膠原蛋白的提取的最佳工藝參數(shù)，優(yōu)化出的最佳工藝參數(shù)為：加酶量6000U/g，提取時(shí)間48h，液料比15:1，此時(shí)膠原蛋白的特征氨基酸羥脯氨酸的得率為40.86%。經(jīng)紫外全波長(zhǎng)掃描分析，鹿骨膠原蛋白在234nm處有最強(qiáng)吸收峰，符合膠原蛋白特征吸

3、收峰在230nm處的特性；鹿骨膠原蛋白的紅外譜圖顯示出其含有4個(gè)酰胺段，顯示出蛋白質(zhì)的特征吸收，且鹿骨膠原蛋白的具有較高的氫鍵結(jié)合能力；鹿骨膠原蛋白形成凝膠的能力要強(qiáng)于牛骨膠原蛋白和豬骨膠原蛋白；DSC掃描分析，鹿骨膠原蛋白的熱轉(zhuǎn)變溫度為119.3℃；經(jīng)SDS-PAGE電泳表明，鹿骨中含有分子量為95KDa的膠原蛋白，并有一個(gè)分子量大于130KDa的膠原蛋白，牛骨和豬骨的分子量范圍與鹿骨大致相同；通過(guò)掃描電鏡分析，鹿骨膠原蛋白呈紡錘型，

4、與哺乳動(dòng)物的類(lèi)似；鹿骨膠原蛋白的氨基酸組成成分分析則表明其為典型的膠原蛋白氨基酸組成。
　?。?）采用分子量5KDa的透析袋及Sephadex G-25對(duì)膠原蛋白進(jìn)行純化，得到分子量大于5KDa、1-5KDa、小于1KDa三個(gè)分子量范圍的膠原蛋白；三種不同分子量的樣品都顯示出較強(qiáng)的·OH和DPPH·自由基清除能力，明顯高于陽(yáng)性對(duì)照；當(dāng)膠原蛋白質(zhì)量濃度呈上升趨勢(shì)時(shí)，不同分子量的膠原蛋白樣品的自由基清除能力逐漸增加；且分子量越小，自由