尖頂羊肚菌胞外多糖提取物抗氧化和延緩衰老的作用研究.pdf

1、本論文選擇尖頂羊肚菌為實(shí)驗(yàn)材料，以深層發(fā)酵獲取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物，通過體外抗氧化實(shí)驗(yàn)、果蠅壽命實(shí)驗(yàn)和小鼠生理、生化實(shí)驗(yàn)來探究其抗衰老功效，并制成了功能性健康食品-尖頂羊肚菌胞外多糖顆粒和膠囊制劑，發(fā)現(xiàn)這兩種食品具有良好的延緩衰老作用。具體實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果如下：
　　 1.尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的制備：采用化學(xué)合成培養(yǎng)基從液體培養(yǎng)發(fā)酵尖頂羊肚菌兩種不同菌株（尖頂羊肚菌M-2和尖頂羊肚菌M-1），將發(fā)酵液濃縮、去蛋白、乙醇沉淀

2、、真空冷凍干燥，獲得尖頂羊肚菌胞外多糖提取物MCEE-1和MCEE-2。
　　 2.體外抗氧化實(shí)驗(yàn)：以Vc為陽性對(duì)照，并對(duì)尖頂羊肚菌抑制ABTS自由基、對(duì)羥基自由基以及對(duì)超氧陰離子的作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)其體外抗氧化活性。結(jié)果表明：抑制不同種自由基所需的多糖濃度有差別。2mg/mL的MCEE-1和MCEE-2對(duì)超氧陰離子的抑制率分別為45.81％、43.06％；1mg/mL的MCEE-1和MCEE-2對(duì)羥基自由基的抑制率

3、分別為60.98％、72.4％；0.1mg/mL的MCEE-1和MCEE-2對(duì)ABTS自由基的抑制率可達(dá)58.79％、77.43％。尖頂羊肚菌胞外多糖對(duì)·OH和O2-·和ABTS+自由基均具有抑制作用，而且成一定的量效關(guān)系，總體效果是Vc的抑制作用最強(qiáng)，MCEE-2比MCEE-1的抑制作用稍強(qiáng)。
　　 3.果蠅壽命實(shí)驗(yàn)：用劑量分別為0.2g/L、1g/L、5g/L和25g/L的胞外多糖提取物作為果蠅的飼料添加物，其中復(fù)合多糖中單

4、糖的比例為1:1即MCEE-1：MCEE-2以1:1的比例混合。結(jié)果表明：尖頂羊肚菌胞外多糖提取物可明顯延長(zhǎng)果蠅的壽命。0.2g/L的MCEE-1可使雌、雄果蠅的壽命分別延長(zhǎng)13.45％和24.58％，使雌雄果蠅的最高壽命分別延長(zhǎng)了20.87％和34.07％，但隨著濃度的升高會(huì)不同程度地縮短果蠅的壽命。0.2g/L的MCEE-2能顯著延長(zhǎng)雌雄果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間和最高壽命（P<0.01），起到較好的延緩衰老作用。0.2g/L的復(fù)

5、合多糖能使雄性果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間和最高壽命都延長(zhǎng)，但不存在顯著性差異。這提示MCEE-2比MCEE-1的延壽效果好，經(jīng)實(shí)驗(yàn)篩選后以MCEE-2做小鼠生理試驗(yàn)。此外，雌雄果蠅對(duì)尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的反應(yīng)存在性別差異，對(duì)雄性果蠅延壽效果比對(duì)雌性果蠅的好。
　　 4.小鼠生理生化實(shí)驗(yàn)：通過注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型，分別用50mg/kg·d、200 mg/kg·d、800mg/kg·d的MCEE-2灌胃衰老模型小鼠，

6、測(cè)定小鼠的臟器指標(biāo)和對(duì)小鼠腦組織中的SOD活性，LF含量及MDA含量的影響。結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)42天后發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，模型組小鼠出現(xiàn)衰老特征，腦組織中的SOD活性下降、LF含量和MDA含量增加，其肝臟組織出現(xiàn)病變現(xiàn)象，造模比較可靠。三個(gè)劑量組的MCEE-2能顯著降低衰老小鼠腦組織中的LF含量和MDA含量，但中、高劑量組的MCEE-2對(duì)衰老小鼠腦組織中的SOD活性影響效果不大明顯，低劑量組的MCEE-2能使雄性、雌性小鼠腦的SOD活性分別

7、提高20.70％、21.13％。這提示MCEE-2具有良好的延緩衰老作用。
　　 5.在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上研制出MCEE-2的功能性健康食品一顆粒沖劑和膠囊制劑，再將此產(chǎn)品進(jìn)行小鼠延緩衰老實(shí)驗(yàn)，顆粒試驗(yàn)組的濃度分別為1962mg/kg·d、654 mg/kg·d；膠囊試驗(yàn)組的濃度分別為165 mg/kg·d、55 mg/kg·d（分別相當(dāng)于含150mg/kg·d、50mg/kg·d的MCEE-2）。結(jié)果表明：此顆粒劑中MCEE-2

8、的含量為3.81％，MCEE-2顆粒劑為乳白色，多糖顆粒的直徑約為0.9mm，顆粒大小均勻，在水中溶解性好，溶液澄清透明，無焦屑等雜質(zhì)，甜味適中；此膠囊中MCEE-2含量為45.32％，MCEE-2膠囊內(nèi)充物為淡黃色，選用0號(hào)膠囊，裝量為0.265g，少量不溶于水。小鼠生理實(shí)驗(yàn)表明：尖頂羊肚菌胞外多糖顆粒和尖頂羊肚菌胞外多糖膠囊對(duì)雄性衰老小鼠血清中的SOD和GSH-Px活力的增加效果較為明顯，降低雌性腦組織中MDA含量的較為明顯。其中，

9、654 mg/kg·d的顆粒沖劑使雄性小鼠血清中的SOD、GSH-Px含量分別提高了60.71％（P<0.01）和66.62％（P<0.01），使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量降低了32.67％（P<0.01）；165mg/kg·d和55mg/kg·d的多糖膠囊可顯著增加雄性小鼠血清中的SOD、GSH-Px含量（P<0.01），使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量分別降低了27.58％（P<0.01）和34.29％（P<0.01）。