茶樹菇胞外多糖及胞內(nèi)硒多糖的提取優(yōu)化和抗氧化研究.pdf

1、茶樹菇(Agrocybe aegerita)，學(xué)名茶薪菇，擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes）、傘菌目(Agaricales)、糞繡傘科（Bolbitiaceae）。富含多種生物活性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多糖、多種微量元素等。茶樹菇多糖在抗氧化、抗衰老、增強免疫力等方面有重要作用。硒是生命活動所必需的微量元素，與肝功能和肌肉代謝相關(guān)，在人體內(nèi)也具有一定的抗氧化性。利用茶樹菇富集硒元素所得到的硒多糖兼有多糖和有機硒的功效，且更易被有機體吸收

2、和利用。本研究采用Plackett-Burman(PB)試驗和響應(yīng)面(response surface methodology，RSM)試驗等方法優(yōu)化了茶樹菇胞外多糖(exopolysaccharide，EPS)和胞內(nèi)硒多糖（intracellular selenium polysaccharide，ISPS）的提取條件，分別分離出EPS、IPS（intracellular polysaccharide）、ISPS三種粗多糖的各種組分，

3、測定了單糖組成與摩爾比，并對EPS、IPS、ISPS進行了體外抗氧化和體內(nèi)抗氧化活性的檢測，得到結(jié)論如下：
　?、挪铇涔揭后w富硒培養(yǎng)結(jié)果表明，在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的無機硒鹽能促進菌絲生長。以茶樹菇生物量為指標(biāo)，確定了培養(yǎng)基中最適的添加濃度為4mg/L，最大富硒率達65％。
　?、评肞B和RSM優(yōu)化，確定了EPS的最佳提取條件為濃縮倍數(shù)3，乙醇倍數(shù)2.4，醇沉溫度-3.8℃，在此條件下，EPS預(yù)測得率為0.70g/L，驗證

4、得率為0.71g/L;確定了ISPS的最佳提取條件為pH8，提取溫度83℃，醇沉溫度12℃，在此條件下ISPS預(yù)測得率為10.56％，驗證得率為11.02％。
　　⑶經(jīng)過DEAE纖維素陰離子交換柱得到EPS中含有三種組分，分別命名為EPS-1、EPS-2和EPS-3; IPS中三種組分:IPS-1、IPS-2和IPS-3; ISPS中三種組分:ISPS-I、ISPS-2和ISPS-3。雖然IPS與ISPS中三種組分出現(xiàn)的峰位置相同

5、，但是其比例大不相同，說明硒的加入一定程度上影響了粗多糖的組成。
　?、冉?jīng)過氣相色譜儀分析了三種粗多糖的單糖組成及摩爾比，表明EPS中含有鼠李糖和葡萄糖，含量分別為7.1％，2.53％，摩爾比為2.8∶1;IPS中單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖，含量分別為5.32％、0.27％、0.54％、0.72％，摩爾比為29.2∶1.8∶3∶4; ISPS中所含有的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，含量分別為7

6、.9％、0.72％、2.28％、5.07％、0.73％，摩爾比為29∶3∶1∶18.8∶2.7。
　?、审w外抗氧化活性。以還原力、羥基自由基(·OH)和二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)為指標(biāo)測定了EPS的各個組分體外抗氧化能力。其中EPS-2的還原力是EPS的10倍，表明其具有較強的體外抗氧化能力。茶樹菇的IPS和ISPS都有較強的抗氧化能力，ISPS的還原力明顯高于IPS，且ISPS對自由基的清除率也明顯高于IPS，表明微量元素

7、硒的加入提高了多糖的抗氧化性。
　?、蔈PS、IPS和ISPS體內(nèi)抗氧化活性。通過測定小鼠血液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的含量及肝臟中的總抗氧化能力(T-AOC)，丙二醛(malondialdehyde，MDA)和膽固醇(Cholesterol)的含量，比較了三種多糖對小鼠體內(nèi)抗氧化能力的影響。結(jié)果表明，三種多糖能明顯提高血液中超氧化物歧化酶(SOD)含量及肝臟中的總抗氧化能力(T-AOC