口腔鱗癌中上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象的初探.pdf

1、目的：
　　運用免疫組織化學(xué)方法分析在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中E-鈣黏蛋白、波形蛋白、β-聯(lián)蛋白及轉(zhuǎn)化生長因子β1的表達(dá)情況，并結(jié)合運用免疫熒光和Transwell小室實驗檢測體外培養(yǎng)的SCC-9和Tca8113兩種口腔鱗癌細(xì)胞中上述四種標(biāo)記物的表達(dá)與其侵襲性的相關(guān)性，探討口腔鱗狀細(xì)胞癌中上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象的基本表現(xiàn)，為進(jìn)一步探究上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象及研究口腔鱗狀細(xì)胞癌預(yù)防提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　?。?）組織學(xué)實驗

2、：收集89例口腔鱗狀細(xì)胞癌組織石蠟標(biāo)本及20例正?？谇火つ?biāo)本，將89例口腔鱗癌分為I級（25例）、II級（34例）、III級（30例），分別進(jìn)行E-鈣黏蛋白、波形蛋白、β-聯(lián)蛋白及轉(zhuǎn)化生長因子β1四種蛋白的免疫組化染色。用半定量法評價免疫組化結(jié)果，統(tǒng)計分析各項指標(biāo)與口腔鱗狀細(xì)胞癌分化程度之間的關(guān)系，以及各項指標(biāo)間的相關(guān)性；（2）細(xì)胞學(xué)實驗：①體外培養(yǎng)SCC-9及Tca8113口腔鱗癌細(xì)胞，制作細(xì)胞爬片，進(jìn)行上述四種蛋白的免疫熒光染色，

3、在熒光顯微鏡下每張爬片隨機選擇5個視野拍照。計算每張照片的平均熒光強度，統(tǒng)計分析兩種細(xì)胞間各蛋白表達(dá)的差異；②體外饑餓培養(yǎng)SCC-9及Tca8113口腔鱗癌細(xì)胞12小時后種于Transwell上室內(nèi)，在下室加入10％胎牛血清培養(yǎng)液。培養(yǎng)36小時后用結(jié)晶紫染色，計算細(xì)胞穿過小室膜底部的數(shù)目。
　　結(jié)果：
　?。?）組織學(xué)實驗結(jié)果：①每組數(shù)據(jù)經(jīng) S-W檢驗，P＜0.05，顯示數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則用中位數(shù)加減四分位數(shù)間距（M±Q

4、R）表示。E-鈣黏蛋白在正常黏膜中評分中位數(shù)為9.00，OSCC組中評分分別為9.00、6.00和6.00，正常組與OSCC組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-4.211，P=0.000），評分與分化程度有關(guān)（P=0.000）；波形蛋白在正常組織中評分為0.00，在OSCC I、II、III級組中評分分別為0.00、0.00和4.00，正常組與 OSCC組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-3.675，P=0.000），評分與分化程度有關(guān)（P=0.000

5、）；β-聯(lián)蛋白在正常組織中評分為9.00，在OSCC I、II、III級組中評分分別為3.00、4.00和3.00，正常組與OSCC組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-6.300，P=0.000），評分與分化程度有關(guān)（P=0.017）；TGF-β1在正常組織中評分為2.00，在OSCC I、II、III級組中評分分別為3.00、4.00和6.00，正常組與OSCC組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-3.329，P=0.000），評分與分化程度有關(guān)（P=0.

6、000）；②四個指標(biāo)相關(guān)關(guān)系：E-鈣黏蛋白與β-聯(lián)蛋白之間存在顯著正相關(guān)（r=0.327，P=0.002），與波形蛋白間存在顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.386,P=0.001），與轉(zhuǎn)化生長因子-β1間存在顯著負(fù)相關(guān)性（r=-0.304，P=0.004）；波形蛋白與轉(zhuǎn)化生長因子-β1間存在顯著正相關(guān)（r=0.401，P=0.000）；（2）細(xì)胞學(xué)實驗結(jié)果：①體外培養(yǎng)癌細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光實驗中，SCC-9中E-鈣黏蛋白未觀察到陽性熒光表達(dá)，波形蛋白

7、、β-聯(lián)蛋白和轉(zhuǎn)換生長因子-β1平均熒光強度均數(shù)分別為0.0531、0.0570和0.0575；Tca8113中E-鈣黏蛋白、波形蛋白、β-聯(lián)蛋白和轉(zhuǎn)換生長因子-β1平均熒光強度均數(shù)分別為0.00145、0.0421、0.0500和0.0499；E-鈣黏蛋白在SCC-9及Tca8113中的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=-1.395，P=0.176）；波形蛋白在SCC-9及Tca8113中的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.125，P=0

8、.003）；β-聯(lián)蛋白在SCC-9及Tca8113中的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.581，P=0.014）；轉(zhuǎn)換生長因子-β1在SCC-9及Tca8113中的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.495，P=0.016）；②癌細(xì)胞Transwell小室侵襲實驗中，SCC-9及Tca8113穿過基質(zhì)膠進(jìn)入小室底的細(xì)胞均數(shù)分別為57.93和42.47，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.309，P=0.003）。
　　結(jié)論：
　?。?

9、）E-鈣黏蛋白和β-聯(lián)蛋白在口腔鱗癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，波形蛋白表達(dá)上調(diào)，轉(zhuǎn)化生長因子-β1總體表達(dá)有上調(diào)趨勢，提示在口腔腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中出現(xiàn)了上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象；（2）口腔鱗癌細(xì)胞膜上，β-聯(lián)蛋白與E鈣黏蛋白之間表達(dá)有顯著的正相關(guān)性，與波形蛋白之間有負(fù)相關(guān)趨勢；轉(zhuǎn)化生長因子-β1與E-鈣黏蛋白之間有顯著的負(fù)相關(guān)性，與波形蛋白之間有顯著正相關(guān)性，提示β-聯(lián)蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子-β1在口腔鱗癌的EMT進(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用。（3）與Tca8