人臍帶間充質(zhì)干細胞的惡性轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、【背景與目的】人臍帶間充質(zhì)干細胞（human umbilical mesenchymal stem cells, HUMSCs）因其具有比骨髓來源的間充質(zhì)干細胞更強的增殖能力和更低的免疫排斥性，已成為目前替代療法、細胞移植和基因治療首選的成體干細胞類型。但近年來提出的體外培養(yǎng)的成體干細胞自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化現(xiàn)象及腫瘤干細胞理論提示我們：HUMSCs在體外培養(yǎng)過程中可能存在“安全隱患”。本研究旨在探討HUMSCs惡性轉(zhuǎn)化的可能性，為其臨床應(yīng)用前的

2、安全性檢測提供可借鑒的檢測模式及探索有效的預(yù)防惡性轉(zhuǎn)化的方法。
　　【材料與方法】采用組織塊貼壁法獲得10批不同臍帶來源的HUMSCs；將第3代生長良好的HUMSCs分成3組，基礎(chǔ)培養(yǎng)基組，DMSO培養(yǎng)組和3-甲基膽蒽（3-MCA）誘導(dǎo)組；通過觀察細胞的形態(tài)差異、生長速度、存活時間、相對端粒長度、端粒酶活性及染色體的變化情況檢測細胞是否進行惡性轉(zhuǎn)化；將細胞注入裸鼠皮下，待包塊長出后取出包塊組織行病理學(xué)免疫組化鑒定，并對其進行腫瘤細

3、胞原代培養(yǎng)及單克隆純化。
　　【結(jié)果】10批基礎(chǔ)培養(yǎng)基組及DMSO培養(yǎng)組細胞生物學(xué)特征相似，細胞生長速率隨著傳代次數(shù)增加逐漸變慢，傳代平均49天后均進入細胞衰老期，并逐漸凋亡，細胞形態(tài)無明顯改變，檢測細胞端粒酶無活性，細胞相對端粒長度逐漸縮短，染色體G顯帶同正常人染色體，裸鼠成瘤實驗中裸鼠自然死亡均未見包塊生長。10批3-MCA誘導(dǎo)組中僅2批細胞出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，表現(xiàn)出腫瘤細胞的特征：細胞形態(tài)變圓，密度高時成鋪路石樣、生長存活時間