Neuropilin-1誘導(dǎo)口腔鱗狀細(xì)胞癌上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及其機(jī)制的研究.pdf

1、口腔鱗狀細(xì)胞癌（Oral squamous cell carcinoma，OSCC）是最常見(jiàn)的口腔惡性腫瘤，具有較強(qiáng)的局部浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力，惡性程度往往較高。上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要的影響。神經(jīng)纖毛素1(Neuropilin-1，NRP1)是一種多功能的跨膜糖蛋白，研究表明其表達(dá)程度與腫瘤的發(fā)生，生長(zhǎng)和預(yù)后密切相關(guān)并且可能參與了某

2、些腫瘤細(xì)胞EMT的進(jìn)程。NRP1誘導(dǎo)口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生EMT可能是其侵襲轉(zhuǎn)移性較強(qiáng)的重要原因。
　　目的：⑴觀察NRP1在口腔鱗癌中的表達(dá)，評(píng)價(jià)NRP1表達(dá)水平與口腔鱗癌臨床病理以及預(yù)后的關(guān)系。⑵明確NRP1上調(diào)后口腔鱗癌細(xì)胞EMT的發(fā)生及生物學(xué)行為的改變。⑶探討NRP-1誘導(dǎo)口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生EMT的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法：①應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)60例口腔鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本及30例正?？谇徽衬そM織標(biāo)本中NRP1的

3、表達(dá)強(qiáng)度、范圍;統(tǒng)計(jì)分析NRP1表達(dá)水平與腫瘤臨床病理以及預(yù)后的關(guān)系。②利用pcDNA3.1-NRP1真核表達(dá)質(zhì)粒及pcDNA3.1空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人口腔鱗癌細(xì)胞系CAL27，HN4及HN6，獲得穩(wěn)定高表達(dá)NRP1的細(xì)胞株（實(shí)驗(yàn)組）及相對(duì)低表達(dá)NRP1的細(xì)胞株（對(duì)照組）。觀察質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后兩組細(xì)胞的表型的改變;應(yīng)用RT-RCR和Western Blot方法分別檢測(cè)兩組細(xì)胞中NRP1以及上皮和間質(zhì)標(biāo)志物mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)變化;應(yīng)用劃痕實(shí)

4、驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、單克隆形成實(shí)驗(yàn)、耐藥實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NRP1高表達(dá)后細(xì)胞生物學(xué)行為的改變。③應(yīng)用RT-RCR和Western Blot方法分別檢測(cè)兩組細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的變化。特異性抑制NF-κB信號(hào)通路活性，觀察細(xì)胞的EMT進(jìn)程能否被逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)果：⑴免疫組織化學(xué)染色顯示:60例口腔鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本中均檢測(cè)出NRP1表達(dá)，而30例正常組織中僅6例檢測(cè)出NRP1表達(dá)，顯示NRP1在腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)(p＜0

5、.001);NRP1的表達(dá)與口腔鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率密切相關(guān)(p＜0.05);生存分析表明NRP1高表達(dá)組總體生存率明顯低于低表達(dá)組患者(p＜0.05)。⑵NRP1高表達(dá)誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞系發(fā)生了明顯的EMT，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，上皮標(biāo)志物E-cadherin和β-catenin表達(dá)下降，間質(zhì)標(biāo)志物vimentin和N-cadherin表達(dá)上升。細(xì)胞的遷移、侵襲、增殖能力以及耐藥性顯著增強(qiáng)，細(xì)胞發(fā)生EMT導(dǎo)致遷移侵襲性增強(qiáng)的同時(shí)獲得了一

6、定的腫瘤干細(xì)胞(cancer stemcell，CSC)樣特性。⑶NF-κB信號(hào)通路在NRP1誘導(dǎo)的口腔鱗癌細(xì)胞EMT進(jìn)程中呈現(xiàn)激活狀態(tài)，特異性抑制NF-κB信號(hào)通路活性，可逆轉(zhuǎn)NRP1高表達(dá)腫瘤細(xì)胞的EMT進(jìn)程，并減弱其遷移、侵襲能力。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)證明NRP1在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及患者的生存率密切相關(guān)。NRP1可通過(guò)激活NF-κB信號(hào)通路誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞發(fā)生EMT，增強(qiáng)其遷移侵襲能力的同時(shí)使