上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)記物在喬本甲狀腺炎中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景和目的：
　　喬本甲狀腺炎是由日本學(xué)者喬本策先生于1912年首先報(bào)道并描述的。主要的病理特征是淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、淋巴濾泡形成和甲狀腺上皮破壞、嗜酸性變及間質(zhì)纖維化，最終導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的甲狀腺功能減退。有關(guān)喬本甲狀腺炎的免疫損傷機(jī)制國(guó)內(nèi)外的研究報(bào)道很多，但其發(fā)生間質(zhì)纖維化的機(jī)制則研究的很少，近些年研究表明，上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化在組織纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中扮演了關(guān)鍵的角色，那么在喬本甲狀腺炎病變發(fā)展過程中是否存在上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化？如果存在，

2、它在甲狀腺間質(zhì)發(fā)生纖維化的過程中又起到了什么重要的作用？那么又有哪些重要的因子調(diào)節(jié)？目前，在此方面研究報(bào)道的還很少，本研究收集101例人喬本甲狀腺炎病變標(biāo)本，利用免疫組化技術(shù)和膠原纖維染色技術(shù)，觀察甲狀腺病變中上皮標(biāo)記物E-cadherin，間充質(zhì)標(biāo)記物Vimentin、 FSP1和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化重要的調(diào)節(jié)因子TGF-β1的表達(dá)情況，結(jié)合間質(zhì)中膠原纖維的染色情況，試圖尋找人喬本甲狀腺炎病變中存在上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的證據(jù)，探索其在間質(zhì)纖維

3、化方面的重要作用。
　　材料和方法：
　　材料：
　　本實(shí)驗(yàn)收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院1998-2011年手術(shù)存檔的甲狀腺手術(shù)石蠟標(biāo)本的101例，另取甲狀腺腫瘤手術(shù)切下來瘤旁正常甲狀腺組織30例做對(duì)照，經(jīng)臨床病理診斷這101例均為喬本甲狀腺炎，其中75例為單純喬本甲狀腺炎，12例合并甲狀腺腺瘤，13例合并甲狀腺乳頭狀癌和1例合并甲亢。
　　在這101例喬本甲狀腺炎中，男性3例，女性98例，平均年齡45.9歲。對(duì)照組全為已

4、婚女性。
　　方法：
　　1．HE染色切片觀察喬本甲狀腺炎的病變特點(diǎn)，確定病理分型。
　　2.膠原纖維染色用Masson染色觀察喬本甲狀腺炎病變中膠原纖維的面積百分比。
　　3.免疫組織化學(xué)染色用 Envision兩步法觀察喬本甲狀腺炎組織中E-cadherin、TGF-β1、FSP1、Vimentin蛋白的表達(dá)情況。
　　4.圖像分析法應(yīng)用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-Pro Plus6.

5、0圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色結(jié)果分析。
　　5.統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用 SPSS13.0對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行分析，采用卡方檢驗(yàn)、方差分析、Spearman等級(jí)相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1. HE和Masson染色觀察，在101喬本甲狀腺炎病變中，淋巴細(xì)胞型（L型）69例，嗜酸性上皮型（O型）22例，明顯上皮破壞型（P型）10例。隨著炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度的升高，間質(zhì)膠原面積的百分比也是逐漸增高的，L型(9.16±3.17％）、O型（20.29±6.

6、08%）、P型（50.12±3.68%），各組間兩兩比較差異均具有顯著性（ P<0.01）。P型炎癥病變中纖維化的百分比達(dá)到50%。30例正常甲狀腺組織中間質(zhì)膠原成分很少，面積百分比僅為2.19±1.74%，與炎癥病變組比較差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　2．上皮細(xì)胞標(biāo)記蛋白E-cad在正常甲狀腺組織90.0%（27/30），喬本甲狀腺炎和其陽性表達(dá)率分別為為60.4%（61/101），兩組比較差異有高度顯著性（P<

7、0.01）。喬本甲狀腺炎濾泡上皮E-cad表達(dá)逐漸減少，隨著炎癥和纖維化程度的增加，E-cad的陽性表達(dá)率逐漸下降。L型，為63.8%（44/69），O型，為54.5%（10/22），P型，為50.0%（5/10）。E-cad的表達(dá)與各病理分型差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記蛋白Vimentin在喬本甲狀腺炎濾泡上皮中從無到有，隨著炎癥和纖維化程度的增加，Vimentin的MOD值逐步增加，L型，為0.

8、1078±0.0700；O型，為0.1379±0.0371；P型，為0.1468±0.0155；各組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，L型與O型和P型比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05），O型與P型比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），30例正常甲狀腺濾泡上皮未見Vimentin陽性。
　　4.上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要調(diào)節(jié)因子 TGF-β1蛋白在喬本甲狀腺炎濾泡上皮中表達(dá)逐漸增加。在101例炎癥病變組各型中， TGF-β1的表達(dá)與喬本甲狀腺炎的

9、分型差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。隨著炎癥和纖維化程度的增加，TGF-β1的MOD值逐步增加，L型，為0.1188±0.0675；O型，為0.1575±0.0177；P型，為0.1681±0.0225；各組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，L型與O型和P型比較差異均有顯著性（ P<0.01），O型與P型比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），30例正常甲狀腺組織未見TGF-β1的表達(dá)。
　　5.上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化特異性蛋白 FSP1主要在喬

10、本甲狀腺炎的成纖維細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中有表達(dá)，在甲狀腺濾泡上皮中幾乎無表達(dá)，極個(gè)別濾泡上皮FSP1表達(dá)陽性。在101例炎癥病變組各型中，F(xiàn)SP1的表達(dá)與喬本甲狀腺炎的分型差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），隨著炎癥和纖維化程度的增加，F(xiàn)SP1的MOD值逐步增加，L型，為0.0784±0.0625；O型，為0.1169±0.0529；P型，為0.1417±0.0561；各組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，L型與O型和P型比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05

11、），O型與P型比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。30例正常甲狀腺組織中FSP1無表達(dá)。
　　6. FSP1表達(dá)陽性的成纖維細(xì)胞個(gè)數(shù)在喬本甲狀腺炎間質(zhì)中逐漸增加。各病理學(xué)類型間比較差異有顯著性（P<0.01），隨著炎癥和纖維化程度的增加，F(xiàn)SP1陽性的成纖維細(xì)胞個(gè)數(shù)逐漸增加，L型，計(jì)數(shù)為8.13±7.14；O型，為13.68±8.78；P型，為20.36±11.74；各組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，L型與O型和P型比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

12、P<0.05），O型與P型比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。30例正常甲狀腺組織中未見FSP1表達(dá)陽性的成纖維細(xì)胞。
　　7.在喬本甲狀腺炎中，TGF-β1和E-cad成負(fù)相關(guān)（r=-0.224，P<0.05），而與Vimentin成正相關(guān)（r=0.701，P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.喬本甲狀腺炎隨病變進(jìn)展，濾泡破壞增加，數(shù)量減少，間質(zhì)膠原含量逐漸增多，病變最嚴(yán)重時(shí)膠原含量超過50%。
　　2.喬

13、本甲狀腺炎中，濾泡上皮E-cad蛋白的表達(dá)隨著病變進(jìn)展逐漸減少，表明上皮性標(biāo)記逐漸脫失。
　　3.間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記蛋白Vimentin在濾泡上皮中從無到有，提示喬本甲狀腺炎發(fā)展過程中濾泡上皮發(fā)生了上皮-間充質(zhì)的轉(zhuǎn)化。
　　4.上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要調(diào)節(jié)因子TGF-β1的表達(dá)在濾泡上皮中從無到有，并隨著炎癥和纖維化程度的增加而逐漸增強(qiáng)。提示甲狀腺的自身免疫損傷可能通過上皮間E-cad蛋白的缺失和Vimentin的出現(xiàn)，導(dǎo)致上皮-