實(shí)時(shí)PCR快速檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的初步研究.pdf

1、目的 建立快速檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的二重實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(duplex real-time PCR)，并將其用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌臨床分離株中MRSA。 方法 采用二重SYBR Green實(shí)時(shí)PCR快速檢測(cè)MRSA的決定基因mecA和金黃色葡萄球菌的種特異性基因nuc，經(jīng)熔解曲線分析鑒定產(chǎn)物。同時(shí)采用瓊脂稀釋法分別測(cè)定頭孢西丁、苯唑西林對(duì)金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)，并將表型試驗(yàn)與基

2、因型測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果 在二重SYBR Green實(shí)時(shí)PCR中，所有MRSA菌株的熔解曲線均呈現(xiàn)mecA、nuc基因特異性的峰，甲氧西林敏感的金葡菌僅有nuc峰，耐甲氧西林的表皮葡萄球菌僅有mecA峰，甲氧西林敏感的表葡菌與其他菌種的菌株無(wú)特異峰出現(xiàn)；當(dāng)MRSA菌濃度達(dá)10<'2>cfu/mL時(shí)就可檢出。在131株臨床金黃色葡萄球菌分離株中，二重實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增mecA基因29.01％(38/131)陽(yáng)性，nuc基因

3、100％陽(yáng)性。單引物與二重實(shí)時(shí)PCR兩者陽(yáng)性擴(kuò)增符合率為100％。瓊脂稀釋法測(cè)定131株臨床分離的金黃色葡萄球菌對(duì)頭孢西丁的耐藥性：耐藥40株，中介3株，敏感88株，耐藥率為30.53％；對(duì)苯唑西林的耐藥性：耐藥45株，敏感86株，耐藥率為34.35％。以基因型測(cè)定結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，頭孢西丁MIC法的靈敏度為94.7％，特異度為93.5％，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為90.0％，陽(yáng)性似然比為14.57；苯唑西林MIC法的靈敏度為92.1％，特異度為89.2