耐甲氧西林金黃色葡萄球菌PVL基因的檢測(cè)及與肺炎的關(guān)系.pdf

1、本文為了解我院近2年來(lái)肺炎患者下呼吸道標(biāo)本中分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)菌株中攜帶PVL基因的檢出情況，以及這些產(chǎn)PVL毒素菌株對(duì)臨床常用抗生素的耐藥情況，同時(shí)分析產(chǎn)PVL毒素的MRSA所致肺炎的危險(xiǎn)因素和臨床特點(diǎn)，以指導(dǎo)臨床有效地防治產(chǎn)PVL毒素的MRSA所致的肺部感染，因此進(jìn)行了本課題的研究。 研究材料與方法： 1.MR

2、SA的檢測(cè)及藥物敏感試驗(yàn)受試菌株：2004年7月-2006年3月間中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院從住院并確診為肺炎患者下呼吸道標(biāo)本中分離的金黃色葡萄球菌(排除同一患者同一部位重復(fù)分離的菌株)。 菌株篩選：凝固酶試驗(yàn)及瓊脂篩選試驗(yàn)篩選MRSA。藥物敏感試驗(yàn)：采用2004年國(guó)際臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NationalCommiteeforClinicalLaboratoryStandards，NCCLS)認(rèn)可的紙片擴(kuò)散法；測(cè)定菌株對(duì)下列14種抗

3、生素藥物敏感性，包括苯唑西林、青霉素、環(huán)丙沙星、莫西沙星、紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、復(fù)方新諾明、利福平、慶大霉素、氯霉素、頭孢西丁、夫西地酸、萬(wàn)古霉素。 2.MRSA-PVL基因的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)菌株：76株經(jīng)瓊脂篩選試驗(yàn)篩選的MRSA菌株作為研究用菌，其中CA-MRSA20株和HA-MRSA56株，均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)。 MRSA-DNA的提?。篋NA提取采用丙酮破壁和堿裂解法。 PVL基因引物L(fēng)uk-PV15’-ATCAT

4、TAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA-3’LuK-PV25’-GCATCAASTGTATTGGATAGCAAAAGC-3’引物參照Lina[54]等報(bào)道的核苷酸序列。 PCR擴(kuò)增PVL基因、產(chǎn)物分析與測(cè)序：PVL基因經(jīng)PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增片斷長(zhǎng)度為433bp。產(chǎn)物采用瓊脂糖凝膠電泳法，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并照相后切膠回收純化，用雙脫氧鏈末端終止法測(cè)序，結(jié)果與GenBank提供的PVL基因核苷酸序列進(jìn)行對(duì)比以確定其基

5、因來(lái)源。 3.PVL-MRSA肺炎的危險(xiǎn)因素與臨床特點(diǎn)分析病例與資料來(lái)源：采用成組病例-對(duì)照研究設(shè)計(jì)，將下呼吸道標(biāo)本中分離到的PVL基因陽(yáng)性MRSA肺炎患者全部列為研究對(duì)象，定為產(chǎn)PVL組。從同時(shí)期下呼吸道標(biāo)本中分離到的PVL基因陰性MRSA所致的全部肺炎患者中隨機(jī)抽取部分病例作對(duì)照，定為非產(chǎn)PVL組。查閱患者住院病歷以收集有關(guān)資料，包括性別、年齡、基礎(chǔ)疾病、侵襲性操作、霧化吸入、有無(wú)應(yīng)用免疫抑制劑、入住重癥監(jiān)護(hù)室、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等

6、可能危險(xiǎn)因素。同時(shí)收集其它一些臨床資料包括有無(wú)混合感染、感染后住院天數(shù)、感染期間有無(wú)發(fā)熱、氣促、咳嗽、咯血、預(yù)后等。 統(tǒng)計(jì)分析方法：使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，單因素分析采用計(jì)數(shù)資料X2檢驗(yàn)或精確概率計(jì)算法。 研究結(jié)果： 1.菌種分離和鑒定2004年7月-2006年3月間分離收集的93株金黃色葡萄球菌主要來(lái)源于呼吸科和肝移植科。93株金黃色葡萄球菌中，76株為MRSA，占81.7％(76/93)。 2.

7、耐藥情況76株MRSA中，CA-MRSA和HA-MRSA各占26.3％、73.7％。兩者均具有多重耐藥性。兩組對(duì)14種抗菌素耐藥率均無(wú)明顯差異。76株MRSA還可分為產(chǎn)PVL組及非產(chǎn)PVL組，兩組均對(duì)多種抗菌素耐藥。非產(chǎn)PVL組易對(duì)四環(huán)素產(chǎn)生耐藥性，產(chǎn)PVL組易對(duì)夫西地酸產(chǎn)生耐藥性。兩組均對(duì)其余12種抗菌素耐藥率均無(wú)明顯差異。76株MRSA均對(duì)萬(wàn)古霉素敏感，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)中度敏感株和耐藥株。 3.PVL基因的檢出情況76株MRSA中1

8、0株獲得了目的基因片斷，其中CA-MRSA與HA-MRSA各有5株，陽(yáng)性率分別為25％、8.9％。產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果與基因文庫(kù)中AB186917.1相似度達(dá)99％。這10株MRSA分離自30-86歲成年人。 4.MRSA-PVL基因與肺炎關(guān)系研究10例產(chǎn)PVL組及50例非產(chǎn)PVL組兩組計(jì)數(shù)資料的單因素分析結(jié)果顯示，兩組在發(fā)病年齡、基礎(chǔ)疾病等危險(xiǎn)因素方面沒(méi)有顯著性差異，而在臨床特征方面，10例產(chǎn)PVL組中出現(xiàn)氣促、低血壓、心率快、咯血比

9、例分別為10/10、4/10、4/10、2/10，并且死亡率高達(dá)30％。而50例非產(chǎn)PVL組中出現(xiàn)氣促、低血壓、心率快、咯血比例為9/50、3/50、3/50、1/50，死亡率為6％。10例產(chǎn)PVL組白細(xì)胞總數(shù)升高不明顯。 研究結(jié)論： 1.本院MRSA的耐藥情況比較嚴(yán)重，CA-MRSA的耐藥情況也較高。目前，萬(wàn)古霉素仍是治療MRSA感染，包括攜帶PVL基因的MRSA感染的首選藥物。 2.本院存在攜帶PVL基因的M