耐甲氧西林金黃色葡萄球菌快速檢測及耐藥基因沉默方法學(xué)研究.pdf

1、目的：建立一種快速檢測臨床標(biāo)本中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的診斷方法及探討siRNA抑制MRSA耐藥基因mecRI的表達(dá)對MRSA耐藥性的影響。
　　方法:利用免疫磁珠分離技術(shù)特異性富集金黃色葡萄球菌，聯(lián)合多重PCR技術(shù)（mecA+femA+IS431）直接檢測臨床標(biāo)本中MRSA；400份各類臨床標(biāo)本同時用五種方法檢測，并以常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)＋PBP2a膠乳凝聚法檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評價(jià)Vitek－32全自動微生物分析儀法、MR

2、SA顯色培養(yǎng)基法、直接多重PCR檢測法、免疫富集聯(lián)合多重PCR檢測的敏感性、特異性；設(shè)計(jì)、合成特異性針對耐藥基因mecRI mRNA的siRNA，將不同劑量siRNA導(dǎo)入MRSA，通過在含苯唑西林的MH平板上MRSA生長情況來評價(jià)siRNA抑制MRSA耐藥基因表達(dá)對細(xì)菌耐藥性的影響。結(jié)果：新建的免疫富集聯(lián)合多重PCR法，最低檢測MRSA濃度1×102CFU/ml，試驗(yàn)時間縮短為6h；細(xì)菌培養(yǎng)＋PBP2a膠乳凝集法為對照，Vitek－32

3、全自動微生物分析儀法、MRSA顯色培養(yǎng)基法、免疫富集聯(lián)合多重PCR檢測法、直接采用多重PCR檢測法的敏感性分別為100％、96.7%、100%、26.7%，特異性分別為98.4%、100%、97.0%、100%；細(xì)菌培養(yǎng)＋膠乳凝集法和免疫富集聯(lián)合多重PCR快速檢測法檢測MRSA結(jié)果比較，兩種方法檢測MRSA的結(jié)果差異有顯著(P<0.05)。通過siRNA導(dǎo)入MRSA后，對含苯唑西林的MH平板上生長后的菌落計(jì)數(shù)進(jìn)行比較，各劑量組中每對si