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文檔簡介
1、前言:
惡性膠質瘤的治療一直是神經外科學的重點和難點?;熓瞧渲饕闹委熓侄沃?。替莫唑胺是目前已經得到大樣本臨床試驗證實的治療惡性膠質瘤的有效藥(盡)管替莫唑胺可有效治療惡性膠質瘤的,但是由于其本身的細胞毒作用并沒有取得令人滿意的控制效果。因此,尋找腫瘤化療輔助藥物,提高替莫唑胺療效,改善患者的生活質量、提高生存率,是治療惡性膠質瘤的重要課題。表沒食子兒茶素沒食子酸酯((-)-Epigallaocatechin-3-gall
2、ate,EGCG)是綠茶的主要成分。多項研究顯示,EGCG可逆轉腫瘤多藥耐藥性(Multipledrug resistance,MDR),有(腫)瘤的耐藥細胞對化療藥物的敏感性。對EGCG和替莫唑胺單獨應用抑制膠質瘤的作用已有大量研究結果,但大部分研究結果只是闡明了藥物作用的生物學效果,具體的分子生物機制一直都不是十分明確。關于EGCG聯合替莫唑胺對膠質瘤細胞的作用目前未見報道,因此本研究旨在觀察EGCG聯合替莫唑胺對膠質瘤細胞U87M
3、G的增殖、凋亡的影響,并初步探討其可能的機制。
實驗方法:
1.MTT法檢測U87MG細胞活力;
2.倒置顯微鏡下觀察U87MG細胞形態(tài);
3.流式細胞術定量檢測U87MG細胞凋亡率;
4.Westem-blot檢測NF-kBp65及survivin蛋白表達。
實驗結果:
1.EGCG對人惡性膠質瘤U87MG細胞活力的影響
不同濃度EGCG(1μM,3μM,
4、10μM,30μM,100μM,300μM),作用相同時間,隨著EGCG濃度的增加對細胞活力影響增加,相同濃度的EGCG分別作用24,48及72h,隨著作用時間延長EGCG對細胞活力抑制程度增加。以上結果提示EGCG以時間、濃度依賴性模式抑制人惡性膠質瘤U87MG細胞活力。
2.EGCG聯合替莫唑胺對U87MG細胞增殖的影響
與對照組比較,30μ M EGCG和100μ M替莫唑胺單獨處理48h后,U87MG細胞增殖
5、明顯抑制(p<0.05)。30μ M EGCG和100μ M替莫唑胺聯合處理瘤細胞后,細胞增殖抑制較EGCG和替莫唑胺單獨處理均更明顯。
3.EGCG協(xié)同替莫唑胺誘導人惡性膠質瘤U87MG細胞凋亡
與對照組相比,EGCG30μM,替莫唑胺100μM及聯合處理組作用48h后細胞凋亡率均明顯增加,差異均具有顯著性(p<0.05),其中聯合處理組作用最顯著。
4.EGCG和替莫唑胺聯合處理對U87MG細胞內Sur
6、vivin的表達水平的影響
與對照組相比,100μ M替莫唑胺處理48 h后,U87MG細胞內Survivin蛋白的表達水平較對照明顯增加(p<0.05)。與此相反的是,30μ M EGCG顯著抑制了Survivin的表達水平(p<0.05)。30μ M EGCG和100μM替莫唑胺聯合處理48小時之后,與對照組相比,Survivin蛋白的表達顯著降低(p<0.05)。
5.EGCG和替莫唑胺聯合處理抑制U87MG細
7、胞內NF-kBp65的表達水平
與對照組相比,100μ M替莫唑胺處理48 h后,U87MG細胞內NF-kBp65蛋白的表達水平較對照輕度增加(p>0.05)。30μm EGCG單獨處理或聯合100μM替莫唑胺處理48 h之后,U87MG細胞內NF-kBp65蛋白的表達水平較對照明顯減少(p<0.05),且聯合處理組降低更明顯。
結論:
EGCG聯合替莫唑胺作用,比EGCG,替莫唑胺單獨應用更有效的抑制誘導
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