替莫唑胺耐藥的惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系耐藥特性演變的研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文替莫唑胺耐藥的惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系耐藥特性演變的研究姓名：潘強(qiáng)申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)神外指導(dǎo)教師：楊學(xué)軍20100501天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文及細(xì)胞存活率；用Westernblot、RTPCR、免疫組化及免疫熒光方法檢測耐藥機(jī)理及增加T№濃度后導(dǎo)致膠質(zhì)瘤耐藥細(xì)胞生長受抑制的可能原因。歷經(jīng)8個(gè)月成功建立了對TMZ耐藥的U251／TR，U251／TR細(xì)胞ICso(220879M)是未經(jīng)誘導(dǎo)U251細(xì)胞IC50(

2、33129M)的667倍(P001)，其耐藥指數(shù)(RF)約為7；U251廠rR細(xì)胞MGMT表達(dá)較未經(jīng)誘導(dǎo)U251細(xì)胞明顯增加(P001)：同時(shí)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)倍增替莫唑胺濃度仍可以使耐藥細(xì)胞生長出現(xiàn)受抑制現(xiàn)象，U251／TR細(xì)胞MGMT檢測結(jié)果顯示其表達(dá)有相應(yīng)下降。第二部分探討沙利度胺聯(lián)合替莫唑胺是否對U251／TR耐藥細(xì)胞耐藥特性有影響，并研究其可能機(jī)制。用MTT法檢測耐藥指數(shù)及細(xì)胞存活率；用Westernblot、RTPCR、免疫熒光等方

3、法檢測蛋白表達(dá)水平：用甲基化特異性PCR檢測MGMT啟動子甲基化情況。給藥24小時(shí)后，雙藥聯(lián)合組的細(xì)胞存活率明顯降低，48小時(shí)后替莫唑胺組細(xì)胞存活率也開始下降，且前者降低更明顯，沙利度胺組基本無下降；雙藥聯(lián)合組及替莫唑胺組MGMT蛋白下降，兩組下降水平無差異；甲基化特異性PCR結(jié)果顯示啟動子區(qū)甲基化情況無改變。結(jié)論：1MGMT表達(dá)水平增高是導(dǎo)致U251／TR對TMZ耐藥的主要機(jī)制；替莫唑胺可以通過消耗MGMT，從而改變耐藥細(xì)胞耐藥特性，