替莫唑胺對(duì)人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞Livin、ABCG2的影響.pdf

1、背景:本研究旨在檢測(cè)抗凋亡基因Livin在人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞中的表達(dá);觀察化療藥物替莫唑胺作用于人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞時(shí)的體外抗瘤效應(yīng);以膠質(zhì)瘤細(xì)胞及其干細(xì)胞為模型來研究腫瘤的耐藥程度，迄今為止，鮮見關(guān)于膠質(zhì)瘤細(xì)胞及其干細(xì)胞Livin基因抗凋亡誘導(dǎo)與化療耐藥的關(guān)系及其機(jī)制方面的系統(tǒng)研究報(bào)告。
　　目的:分析化療藥物替莫唑胺干預(yù)人腦膠質(zhì)瘤T J905細(xì)胞及其干細(xì)胞模型，檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞生存率、細(xì)胞周期變化和Livin

2、 mRNA、耐藥基因ABCG2 mRNA表達(dá)量的影響，進(jìn)而從膠質(zhì)瘤細(xì)胞及干細(xì)胞理論角度揭示腫瘤耐藥的根源，豐富和發(fā)展腫瘤細(xì)胞及其干細(xì)胞理論基礎(chǔ)，為膠質(zhì)瘤的治療提供新的思路和方法。為攻克膠質(zhì)瘤的化療耐藥難關(guān)奠定堅(jiān)實(shí)的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞，采用免疫磁珠法從培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞系中分選CD133+膠質(zhì)瘤于細(xì)胞，對(duì)得到的干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)及CD133+鑒定。構(gòu)建人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞模

3、型，采用不同藥物濃度（0μmol/l、50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l、400μmol/l）的替莫唑胺在不同時(shí)間點(diǎn)(24 h、48 h、72 h)干預(yù)人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞模型，對(duì)干預(yù)前后的人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞模型，采用細(xì)胞劃痕技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力變化、CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖趨勢(shì)變化、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化、RT-PCR技術(shù)Livin、ABCG2 mRNA表達(dá)量表達(dá)規(guī)律。
　

4、　結(jié)果:
　　1.相同干預(yù)時(shí)間，不同濃度的替莫唑胺干預(yù)人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞，遷移速度隨藥物濃度增加而降低(P＜0.05);人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞在相同濃度的替莫唑胺干預(yù)下，遷移速度隨藥物干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而降低(P＜0.05)。
　　2.隨替莫唑胺濃度的升高和干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞的密度降低，細(xì)胞出現(xiàn)皺縮，增殖受到明顯抑制，并見散在的細(xì)胞碎片;人腦膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞出現(xiàn)裂解、萎縮。
　　3.在相

5、同藥物濃度干預(yù)時(shí)間的條件下，隨著培養(yǎng)液中替莫唑胺濃度的增加，TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞的存活率逐漸降低（P＜0.05）;在相同藥物濃度的條件下，人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞存活率隨替莫唑胺干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而降低(P＜0.05)。人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞的存活率均低于TJ905干細(xì)胞。
　　4.替莫唑胺干預(yù)人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞，使細(xì)胞周期停滯在G0-G1期、G2-M期;相同干預(yù)時(shí)間條件下，隨著替莫唑胺濃度增加細(xì)胞周期在G0-G

6、1期、G2-M期所占比例越多(P＜0.05);相同藥物濃度條件下，隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞周期在G0-G1期、G2-M期占比例越多(P＜0.05); G0-G1期所占比例均高于G2-M期。
　　5.替莫唑胺干預(yù)人腦膠質(zhì)瘤TJ905干細(xì)胞，使細(xì)胞周期停滯在G2-M期、S期，相同干預(yù)時(shí)間條件下，隨著替莫唑胺濃度增加細(xì)胞周期在G2-M期、S期所占比例越多(P＜0.05);相同藥物濃度條件下，隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞周期在G2-M期、S期期所

7、占比例越多（P＜0.05）;S期所占比例均明顯高于G2-M期。
　　6.相同干預(yù)時(shí)間，不同濃度的替莫唑胺干預(yù)人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞，隨著藥物濃度的升高，Livin mRNA表達(dá)逐漸下降（P＜0.05），ABCG2 mRNA表達(dá)逐漸增高（P＜0.05）;相同濃度的替莫唑胺干預(yù)人腦膠質(zhì)瘤人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞，隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，Livin mRNA表達(dá)逐漸下降，ABCG2 mRNA表達(dá)逐漸升高。人腦膠質(zhì)瘤T

8、J90干細(xì)胞中Livin mRNA表達(dá)量低于其同源細(xì)胞，而ABCG2mRNA表達(dá)量高于其同源細(xì)胞(P＜0.05);且在不同藥物濃度的與時(shí)間的干預(yù)下人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞中Livin mRNA下降率明顯高于其干細(xì)胞、ABCG2 mRNA上升率明顯低于其干細(xì)胞。
　　結(jié)論:替莫唑胺能有效抑制人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞中Livin mRNA的表達(dá)，誘導(dǎo)ABCG2 mRNA表達(dá)增高，促使人腦膠質(zhì)瘤TJ905細(xì)胞及其干細(xì)胞細(xì)胞周期