左乙拉西坦與替莫唑胺聯(lián)合用藥對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞耐藥的影響.pdf

1、目的:為了尋找有效的治療腦膠質(zhì)瘤的新方法，在原來的治療方法的基礎(chǔ)上做了進(jìn)一步的研究。替莫唑胺(TMZ)是已知的治療腦部腫瘤的首選藥，但有耐藥作用。有文獻(xiàn)表明左乙拉西坦(LEV)可能對(duì)膠質(zhì)瘤MGMT基因有抑制作用。本文主要研究左乙拉西坦本身對(duì)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)是否有抑制作用，聯(lián)合給藥后兩種藥物的結(jié)合對(duì)膠質(zhì)瘤的治療是否有協(xié)同作用。
　　方法:購(gòu)買人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞，先進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中，先分出一部分細(xì)胞，用左乙拉西坦給藥培養(yǎng)，

2、先分為對(duì)照組和左乙拉西坦藥物組，分別測(cè)定對(duì)照組和左乙拉西坦藥物組的細(xì)胞增殖曲線圖。繼續(xù)培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞總量達(dá)到所需量時(shí)，對(duì)培養(yǎng)好的細(xì)胞進(jìn)行分組，對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行給藥培養(yǎng)，并分為左乙拉西坦(LEV)藥物組、替莫唑胺(TMZ)藥物組、替莫唑胺和左乙拉西坦聯(lián)合用藥(LEV+TMZ)藥物組和對(duì)照組（未給藥），分別給幾種藥物組內(nèi)的細(xì)胞加入等體積的相應(yīng)的藥物進(jìn)行培養(yǎng)，空白組加入等量的生理鹽水，分別在給藥后24h、48h、72h、96h四個(gè)時(shí)間

3、點(diǎn)觀察各組內(nèi)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的形態(tài)變化和增殖情況;用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)LEV藥物組、TMZ藥物組、LEV+TMZ藥物組和對(duì)照組在以上時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞中ki-67、VEGF和MGMT蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:細(xì)胞的增殖曲線表明，左乙拉西坦給藥后細(xì)胞的吸光值相對(duì)對(duì)照組較低，說明左乙拉西坦組的膠質(zhì)瘤細(xì)胞數(shù)量較少，左乙拉西坦對(duì)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)有抑制作用。
　　免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:用免疫組化的圖片測(cè)定光密度，用得出的光密度數(shù)值計(jì)算出每組圖片的IOD值

4、，三種指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果幾乎一致，LEV給藥后，隨著時(shí)間的增加，膠質(zhì)瘤細(xì)胞的IOD值逐漸降低，說明膠質(zhì)瘤細(xì)胞的數(shù)量逐漸減少，左乙拉西坦對(duì)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)有一定的抑制作用;TMZ給藥組細(xì)胞在72h時(shí)之前，細(xì)胞的IOD值逐漸降低，與對(duì)照組差異極顯著，但是在96h時(shí)細(xì)胞的IOD值開始回升，說明膠質(zhì)瘤細(xì)胞的數(shù)量開始增加，說明細(xì)胞對(duì)替莫唑胺的敏感性降低，開始出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象;LEV+TMZ藥物組的細(xì)胞，隨著時(shí)間的推移，IOD值逐漸降低，且幅度較大，與對(duì)照組之

5、間差異極顯著，說明膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)聯(lián)合用藥組有明顯的敏感性，明顯的減少了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的數(shù)量，起到了較好的治療作用。
　　結(jié)論:通過增殖曲線說明左乙拉西坦對(duì)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。
　　免疫組化檢測(cè)結(jié)果表明，替莫唑胺在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)可以抑制膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)，有較好的治療效果，但是隨著時(shí)間的推移，膠質(zhì)瘤的數(shù)量又開始增加，說明替莫唑胺在治療膠質(zhì)瘤的過程中確實(shí)出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象。
　　而替莫唑胺和左乙拉西坦聯(lián)合用藥組的細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)期間細(xì)胞