雷公藤甲素協(xié)同替莫唑胺殺傷膠質瘤細胞及膠質瘤起始細胞.pdf

1、膠質母細胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）是成人最常見的原發(fā)性腦腫瘤，雖然以Stupp標準治療方法使膠質瘤的療效有了明顯提高，但其5年生存率僅有9.8％。目前替莫唑胺（temozolomide，TMZ）是膠質瘤的特效化療藥物，使得新診斷的GBM中位生存期由12.1個月提高至14.6個月，但是由于內源性和獲得性耐藥， TMZ化療作用仍不理想。膠質瘤起始細胞（Glioma Initiating Cells,GIC

2、）是腫瘤中存在的一小部分細胞，這些細胞具有自我更新的能力，分化能力，腫瘤形成能力。這些細胞被認為可能是腫瘤形成的根源，比其他分化的腫瘤細胞對放化療更加耐藥，是導致腫瘤復發(fā)的根源。因此，尋找增敏TMZ的藥物并探討化療耐藥的機制成為當前迫切的任務。目前，有許多針對腫瘤化療耐藥的藥物研究，其中有發(fā)現(xiàn)中國的傳統(tǒng)藥物雷公藤甲素（triptolide,TPL）對多種腫瘤包括膠質瘤、乳腺癌、胃癌、膀胱癌等均有抗癌作用，其抗癌活性強。并有研究發(fā)現(xiàn)TPL

3、能增加多種化療藥物的敏感性。本研究擬探討雷公藤甲素是否能增敏替莫唑胺殺傷膠質瘤細胞及膠質瘤起始細胞，并探討其作用機制，揭示膠質母細胞瘤對TMZ的化療耐藥的可能機制及雷公藤甲素的治療意義。
　　第一部分、雷公藤甲素增敏替莫唑胺殺傷膠質瘤細胞
　　目的：探討雷公藤甲素是否能增加替莫唑胺殺傷膠質瘤細胞的效應及其可能機制。
　　方法：使用 CCK-8法測定 TPL與TMZ對膠質瘤細胞增殖的影響；采用Chou–Talalay法評

4、估TPL與TMZ的聯(lián)合效應；分別應用流式細胞儀檢測細胞周期技術、流式細胞儀檢測細胞凋亡技術與Western-blot技術檢測TPL與TMZ單藥或聯(lián)合作用于 U87膠質瘤細胞后的細胞周期、細胞凋亡及其相關蛋白表達的變化。
　　結果：TPL與TMZ作為單藥均能夠以劑量依賴性的抑制膠質瘤細胞增殖；在U87膠質瘤細胞系與SKMG-1膠質瘤細胞系中，TPL聯(lián)合TMZ抑制U87細胞與SKMG-1細胞達IC50時聯(lián)合指數(combination

5、 index，CI)分別為0.76與0.866，表明TPL與TMZ具有協(xié)同作用；TPL與TMZ聯(lián)合用藥后，U87細胞凋亡比例顯著高于單藥用藥組（p<0.05）；TPL與TMZ聯(lián)合用藥后，NF-κB信號轉導通路中P-I-κBα以及抗凋亡蛋白XIAP的表達明顯下調。
　　結論：TPL可能通過抑制 NF-κB信號轉導通路的活化并進一步誘導膠質瘤細胞凋亡來增加TMZ對膠質瘤細胞的殺傷效應。
　　第二部分、雷公藤甲素增敏替莫唑胺殺傷膠

6、質瘤起始細胞
　　目的：探討雷公藤甲素是否能增加替莫唑胺殺傷膠質瘤起始細胞的效應及其可能作用機制。
　　方法：使用CCK-8法測定TPL和TMZ對膠質瘤起始細胞殺傷作用的影響，根據Chou–Talalay法計算的CI評估TPL和TMZ的聯(lián)合作用，使用腫瘤球形成實驗測定藥物對膠質瘤起始細胞的自我的更新作用的影響，使用流式細胞儀檢測技術和western-blot技術檢測藥物對膠質瘤起始細胞凋亡作用的影響，使用雙熒光素酶報告基因檢

7、測系統(tǒng)檢測藥物對NF-κB轉錄活性的影響，使用western-blot技術檢測藥物對NF-κB信號通路下游蛋白、P-P65和P-I-κBα、P65核蛋白表達的影響，動物實驗觀察藥物對小鼠生存期的影響。
　　結果：TPL與TMZ作為單藥均能夠以劑量依賴性的抑制膠質瘤起始細胞增殖，但是膠質瘤起始細胞對TMZ耐藥，我們測得 GSC-1與GSC-2的IC50分別為779.5umol/l和943.5umol/l。TPL能協(xié)同TMZ殺傷膠質瘤

8、起始細胞，即能增強TMZ的殺傷作用又能減少TMZ的使用劑量。TPL聯(lián)合TMZ能顯著抑制膠質瘤起始細胞的自我更新能力并誘導其凋亡。TPL聯(lián)合TMZ能顯著抑制NF-κB的轉錄活性，并下調NF-κB信號通路下游蛋白、P65核蛋白、P-P65和P-I-κBα表達。在體內實驗中，TPL聯(lián)合TMZ用藥后，小鼠遠期生存時間較單獨用藥組顯著延長。
　　結論：TPL能協(xié)同TMZ殺傷膠質瘤起始細胞，其作用機制可能是通過抑制NF-κB信號通路的活化并進