γH2AX檢測指導(dǎo)腫瘤治療作用的研究.pdf

1、目的： 通過檢測磷酸化組蛋白(γH2AX) 的表達(dá)，反映腫瘤細(xì)胞放化療的敏感性，探尋指導(dǎo)腫瘤治療經(jīng)濟(jì)、簡便、快速的方法。 方法： 1.細(xì)胞處理 1.1 X 線照射： 以不同劑量X線照射肝癌細(xì)胞系HepG2.215，檢測磷酸化組蛋白γH2AX 的表達(dá)及細(xì)胞活性。 1.2 藥物作用： 用不同濃度依托泊苷、阿霉素、絲裂霉素和順鉑處理肝癌細(xì)胞系HepG2.215，檢測磷酸化組蛋白γH2AX

2、的表達(dá)及細(xì)胞活性。 2.免疫細(xì)胞化學(xué)： 采用鏈霉親和生物素蛋白-過氧化物酶法(SP法)，顯示磷酸化組蛋白γH2AX灶點。 3.流式細(xì)胞術(shù)： 采用間接熒光抗體標(biāo)記法，檢測表達(dá)γH2AX的細(xì)胞分?jǐn)?shù)。 4.MTT (噻唑藍(lán))比色法： 檢測同期照射或化療藥物處理后細(xì)胞的活性。 結(jié)果： 1.細(xì)胞經(jīng) X 線照射后，γH2AX 的表達(dá)呈劑量依賴性，隨著照射劑量的增高而增高；γHZAX 的

3、表達(dá)水平與細(xì)胞的死亡率呈正相關(guān)，γH2AX 的表達(dá)越高，細(xì)胞的死亡率越高。 2．細(xì)胞經(jīng)不同濃度化療藥物處理后，對于同一種藥物的不同劑量(濃度)而言，γH2AX 的表達(dá)隨劑量(濃度)的增高而增高；γH2AX的表達(dá)與細(xì)胞死亡率呈正相關(guān)，γH2AX的表達(dá)越高，細(xì)胞的死亡率越高。 3．將γH2AX的相對表達(dá)與細(xì)胞死亡率作相關(guān)性分析，兩者亦呈正相關(guān)，γH2AX的表達(dá)越高，細(xì)胞的死亡率越高。 結(jié)論： γH2AX 的表