γH2AX在指導(dǎo)肺癌患者個體化治療中的作用研究.pdf

1、目的：通過分別檢測肺癌患者腫瘤細(xì)胞及外周血淋巴細(xì)胞中磷酸化組蛋白(γH2AX)表達(dá)的情況，反映該患者癌細(xì)胞及外周血淋巴細(xì)胞對放化療敏感性的意義，探尋用腫瘤細(xì)胞甚至外周血標(biāo)本預(yù)測腫瘤患者對放化療敏感性經(jīng)濟(jì)、簡便、快速的方法，以指導(dǎo)腫瘤患者的個體化治療。
　　 方法：
　　 1．細(xì)胞培養(yǎng)
　　 將癌患者腫瘤組織制備成單細(xì)胞懸液，進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)；采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測驗證細(xì)胞；抽取同一患者的外周血，分離淋巴細(xì)胞，用

2、含PHA（植物血凝素）的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，使其大量增殖。
　　 2．細(xì)胞處理
　　 2.1藥物作用用不同質(zhì)量濃度順鉑、卡鉑、吉西他濱、阿霉素同時處理腫瘤細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，分別檢測磷酸化組蛋白γH2AX的表達(dá)及細(xì)胞活性。
　　 2.2 X線照射
　　 以不同劑量X線照射癌細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，分別檢測磷酸化組蛋白γH2AX的表達(dá)及細(xì)胞活性。
　　 3．γH2AX的檢測采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法，標(biāo)記腫瘤細(xì)胞及淋

3、巴細(xì)胞內(nèi)磷酸化組蛋白γH2AX的灶點數(shù)；流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤細(xì)胞及淋巴細(xì)胞內(nèi)陽性表達(dá)γH2AX的細(xì)胞分?jǐn)?shù)；同時采用MTT（噻唑藍(lán)）比色法，檢測經(jīng)相同藥物處理后腫瘤細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的增殖抑制率，計算細(xì)胞死亡率。
　　 結(jié)果：
　　 1．腫瘤細(xì)胞經(jīng)不同質(zhì)量濃度藥物處理后，對同一藥物而言，γH2AX的表達(dá)呈藥物依賴性，隨著藥物濃度的增高而增高；γH2AX的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的死亡率具有相關(guān)性，γH2AX的表達(dá)越高，腫瘤細(xì)胞的死亡率

4、越高；每種藥物之間γH2AX表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與腫瘤細(xì)胞死亡率之間的差異具有一致性。
　　 2．腫瘤細(xì)胞經(jīng)X線照射后，γH2AX表達(dá)的灶點數(shù)及陽性表達(dá)γH2AX的細(xì)胞數(shù)均呈劑量依賴性，隨著照射劑量的增高而增高；同時腫瘤細(xì)胞死亡率也呈照射劑量依賴性，照射劑量越大，死亡率越高；而γH2AX的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的死亡率呈正相關(guān)，γH2AX的表達(dá)越高，腫瘤細(xì)胞的死亡率越高。
　　 3．患者淋巴細(xì)胞經(jīng)不同劑量X線照射后，γH

5、2AX表達(dá)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，淋巴細(xì)胞死亡率之間的差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義；淋巴細(xì)胞經(jīng)不同質(zhì)量濃度的化療藥物處理后，γH2AX表達(dá)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，淋巴細(xì)胞死亡率之間的差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：γH2AX表達(dá)水平的差異與肺癌患者癌細(xì)胞的死亡率之間的差異具有一致性，說明γH2AX可在一定程度上反映腫瘤細(xì)胞對于放療及某些化療藥物的敏感性，提示γH2AX有望成為檢測腫瘤患者對放化療敏感性的指標(biāo)，對指導(dǎo)腫瘤患者的個體化治療有重要意義