γ-H2AX與周期蛋白在食管癌中的表達(dá)及其預(yù)后意義.pdf

1、背景與目的：
　　食管癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其中50％以上的新發(fā)病例發(fā)生在我國(guó)，目前我國(guó)已是全球食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國(guó)家，且患者的5年生存率不到10%。腫瘤的發(fā)生常伴隨著DNA損傷，其中雙鏈損傷是最嚴(yán)重的類(lèi)型之一，目前γ-H2AX被看作是DNA雙鏈損傷一個(gè)標(biāo)志性的蛋白，且在雙鏈損傷修復(fù)過(guò)程當(dāng)中起到重要的連接作用，參與啟動(dòng)DNA修復(fù)反應(yīng)。此外腫瘤也被認(rèn)為是一種細(xì)胞周期疾病，細(xì)胞生長(zhǎng)周期的失調(diào)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有直接關(guān)系

2、。CyclinDl為G1期細(xì)胞周期素，其表達(dá)一旦失控，將會(huì)引起細(xì)胞增殖周期失調(diào)，從而引起腫瘤的發(fā)生。PCNA在G1期開(kāi)始增加，至S期達(dá)到高峰，參與DNA的合成并在細(xì)胞周期中起重要的調(diào)控作用。CyclinB1是控制細(xì)胞進(jìn)入G2/M期的關(guān)鍵因子，在G2晚期達(dá)到峰值。人類(lèi)腫瘤中存在DNA損傷已經(jīng)被證實(shí)，但至今關(guān)于DNA雙鏈損傷與細(xì)胞周期之間關(guān)系的研究甚少。本課題主要研究γ-H2AX與細(xì)胞周期蛋白（CyclinD1、PCNA、CyclinB1）

3、之間的關(guān)系，探討它們?cè)谑彻馨┌l(fā)生發(fā)展中的作用，為更好地指導(dǎo)臨床診斷與治療預(yù)后提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)標(biāo)本86例無(wú)放化療史的食管癌組織標(biāo)本，12例上皮內(nèi)瘤變組織標(biāo)本、39例遠(yuǎn)端正常粘膜組織標(biāo)本。并整理86例患者臨床相關(guān)病理資料和34例患者隨訪情況資料。
　　2. HE染色觀察食管癌、上皮內(nèi)瘤變及遠(yuǎn)端正常粘膜標(biāo)本的組織學(xué)形態(tài)。
　　3.免疫組織化學(xué)染色應(yīng)用Envision兩步法分別檢測(cè)γ-

4、H2AX、CyclinD1、PCNA和CyclinB1在食管組織中的表達(dá)。
　　4.細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)食管癌細(xì)胞系EC1中γ-H2AX與CyclinB1的共表達(dá)情況。
　　5.圖像分析法用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-Pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行分析。
　　6.統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析它們的陽(yáng)性表達(dá)與食管癌各臨床病理特征的關(guān)系，

5、Kaplan-Meier法比較組間生存時(shí)間的差別，生存時(shí)間比較采用Log-rank test。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.食管癌組γ-H2AX的陽(yáng)性表達(dá)率為68.6%（59/86），稍高于EIN組的陽(yáng)性表達(dá)率66.7%（8/12），且兩者明顯高于遠(yuǎn)端粘膜組12.8%（5/39），三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。食管癌組CyclinB1的陽(yáng)性表達(dá)率為74.4%（6

6、4/86），高于EIN組的陽(yáng)性表達(dá)率66.7%（8/12）及遠(yuǎn)端粘膜組35.9%（14/39），三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.γ-H2AX蛋白表達(dá)減少與食管癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；CyclinD1、PCNA蛋白表達(dá)的增強(qiáng)與食管癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)（P<0.05）；CyclinB1蛋白的表達(dá)與臨床各病理參數(shù)均無(wú)明顯相關(guān)。
　　3.在食管癌組織中，γ-H2AX的表達(dá)與Cy

7、clinB1的表達(dá)之間呈正相關(guān)性(r=0.235，P=0.029)，γ-H2AX的表達(dá)與CyclinD1及PCNA的表達(dá)之間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。
　　4. Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)檢測(cè)γ-H2AX、CyclinD1、PCNA及CyclinB1等蛋白的表達(dá)情況對(duì)食管癌患者的生存率的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但聯(lián)合檢測(cè)γ-H2AX、CyclinB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)組的生存率高于陰性表達(dá)組，其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank te