載脂蛋白D在食管癌中的表達及預后的關(guān)系.pdf

1、背景:
　　食管癌在全球癌癥中的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，雖然近年來有關(guān)食管癌新的診療手段取得了巨大進展，但其5年生存率仍只有3％-10％。本課題組在對河南食管癌高發(fā)區(qū)患者進行的長期臨床隨訪中發(fā)現(xiàn)，一些中晚期患者可以長期帶瘤生存。同屬中晚期，患者的生存期存在很大的差異，這提示了臨床上單純依靠TNM分期評價食管癌預后和轉(zhuǎn)歸可能存在一定的局限性。因此，尋找新的能反映食管癌預后的生物標記物成為國內(nèi)外學者研究的方向。據(jù)報道，載脂蛋白D(

2、apolipoproteinD，ApoD)與多個腫瘤因子均有密切的聯(lián)系，其存在參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后，其中包括食管癌。
　　目的:
　　探討ApoD在不同生存期食管癌患者血清及組織中表達水平的差異及與預后的相關(guān)性，尋找與食管癌預后有關(guān)的生物標志物，為臨床診療及風險預測提供參考。
　　方法:
　　1.病例選擇及分組:選取食管癌高發(fā)區(qū)某三甲腫瘤醫(yī)院行食管癌根治術(shù)的患者731例，患者的臨床病理資料完整，術(shù)前血

3、清及術(shù)中病理標本保存完好。隨后本課題組對所有患者或其家屬進行電話隨訪及家庭隨訪，以明確患者術(shù)后生存情況，隨訪時間截止到2013年12月，將調(diào)查結(jié)果錄入計算機。按照納入和排除標準篩選患者資料及標本后，從剩余符合標準的對象中隨機抽取生存期≤3年和生存期≥5年的兩組患者各34例作為研究組，再加入經(jīng)體檢確定為健康者10例作為對照組。
　　2.差異蛋白篩選:經(jīng)過同位素標記相對和絕對定量法(isobaric tags for relative

4、 andabsolute quantification，iTRAQ)聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解吸離子化串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOF MS)蛋白質(zhì)組學技術(shù)對生存期≤3年組、生存期≥5年組和健康人群組的血清中表達的蛋白進行分析比照，再經(jīng)heatmap層次聚類分析，確定目的蛋白ApoD。
　　3.血清驗證:采用Western blot技術(shù)觀察載脂蛋白D在不同生存期患者術(shù)前血清及正常人血清中的表達差異，驗證前期iTRAQ聯(lián)合MAL

5、DI-TOF/TOF MS的結(jié)論。
　　4.組織驗證:通過免疫組化觀察不同生存期食管癌組織及食管正常組織中載脂蛋白D的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.運用iTRAQ聯(lián)合MALDI-TOF/TOF MS技術(shù)共確定有詳細的定量信息556種蛋白，其中表達具有顯著差異性的蛋白有253種，有52種蛋白的表達隨食管癌生存期延長而上調(diào)，48種蛋白的表達隨生存期延長而下調(diào)。ApoD是52種表達上調(diào)的蛋白之一，heatmap層次聚類分析

6、發(fā)現(xiàn)ApoD與食管癌長生存期呈顯著正相關(guān)。
　　2.應用Western blot進一步驗證ApoD在血清中的表達情況，結(jié)果顯示ApoD在生存期≥5年組血清中表達最高，正常人血清中表達其次，而在生存期≤3年組中表達最低。各組間兩兩相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　3.免疫組化結(jié)果顯示ApoD在正常食管鱗狀上皮中呈高表達，而在癌組織中低表達，其中生存期≥5年組表達情況高于生存期≤3年組;生存期≥5年組與食管正常組織