食管癌DNA倍體類型與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、目的:食管癌是威脅人類生命健康的一種惡性腫瘤,約半數(shù)患者確診時(shí)已失去根治性切除機(jī)會(huì),超過(guò)95﹪的患者就診時(shí)己屬臨床中、晚期,雖經(jīng)手術(shù)切除其療效仍不滿意.手術(shù)治療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是影響其療效的主要原因.預(yù)見(jiàn)食管癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)性,從而加強(qiáng)對(duì)高?；颊叩妮o助治療和隨訪,以便早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)加強(qiáng)進(jìn)一步的治療,這樣就有希望提高患者的治愈率及生存率.方法:1病例的選擇:選1990~1996年間保定市第三醫(yī)院胸外科行食管癌根治病人的存檔石蠟包埋組織塊共74例,

2、人選病例均符合下述條件:(1)隨訪年限最短者不少于五年,如少于五年為己知確實(shí)亡,并且死于食管癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移.(2)均為原發(fā)性食管癌并首次行外科治療者.(3)手術(shù)時(shí)均沒(méi)有遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移.及周圍臟器受侵(無(wú)T4).()均行食管癌根治術(shù)(清掃相應(yīng)淋巴結(jié)),并有確切的病理診斷.(5)均沒(méi)有接受術(shù)前輔助性放療和化療,(6)取每例病人腫瘤上端或下端的正常食管石蠟包埋組織作為DNA檢測(cè)的內(nèi)部參考標(biāo)準(zhǔn).2 單細(xì)胞懸液的制備:食管癌病人術(shù)后標(biāo)本,腫物及其上端

3、或下端正常食管粘膜的石蠟包埋組織塊共148例,每例切取5μm切片一張,作HWE色,由同一病理醫(yī)師復(fù)查病理診斷及分級(jí),同時(shí)每例切取40μm切片4—5張置于10ml玻璃離心管內(nèi).3 細(xì)胞懸液DNA染色上機(jī)前將正常食管粘膜組織的單細(xì)胞懸液加入至食管癌組織的單細(xì)胞懸液中同步進(jìn)行DNA 染色:每管加入0.1ml﹪ RNA酶2ml,370C水浴振蕩10分鐘,離心,然后加入5μg/ml碘化丙陡1ml,靜置染色30分鐘上機(jī)檢測(cè),染色在0—4℃下進(jìn)行.4

4、DNA 含量測(cè)定方法使用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS420型)以波長(zhǎng)488nm,功率為300mW氫 離子激光作激發(fā)光源,細(xì)胞發(fā)出的熒光信號(hào)以組方圖或點(diǎn)陣圖及數(shù)字表的形式在多道脈沖分析儀上顯示.所得數(shù)據(jù)經(jīng)計(jì)算機(jī)處理,調(diào)整儀器的CV值,使穩(wěn)定在3﹪-5﹪之間.5 結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)腫瘤細(xì)胞倍體性的確定按Frieellander標(biāo)準(zhǔn),即二倍體腫瘤只有單一的G<,1>峰,如果直方圖中還有額外的G<,1>峰,那么可確定為異倍體.以D指數(shù)(DNAInd

5、ex,DI)表示DNA含量,DI等于腫瘤細(xì)胞G<,0>/G<,1>峰的均道值除以正常細(xì)胞的DNA含量的Go/G<,1>峰均道值.將細(xì)胞周期分為Go/G<,1>、S、G<,2>M期,細(xì)胞周期時(shí)相分布的計(jì)算采用價(jià)款加寬矩形擬合模型,并計(jì)算PI值:PI:S+G<,2>M/Go/G<'1>+S+G<,2>M,所得數(shù)據(jù)經(jīng)X<'2>檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.結(jié)論:該實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明,食管癌DNA 倍體分析可以作為判定手術(shù)治療食管癌患者預(yù)后的一個(gè)客