腫瘤組織浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞在食管癌中表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、食管癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一。盡管采用手術(shù)、放療和化療的聯(lián)合治療,5年生存率仍然較低,因此,分析與腫瘤預(yù)后有關(guān)的因素,對(duì)提高食管癌病人的生存率有重要價(jià)值。大量的臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn),部分早期食管癌、結(jié)腸癌、賁門癌等在手術(shù)切除后不久就出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移;而有些局部進(jìn)展期腫瘤,甚至腫瘤沒被完全切除(R1或R2)的患者,術(shù)后仍能長(zhǎng)期生存甚至治愈。大量的實(shí)例證明,確實(shí)存在著一些超越TNM分期、或分期以外的因素影響著腫瘤的治療效果。
　　腫瘤浸潤(rùn)

2、淋巴細(xì)胞(tumor infiltrating lymphoc),tes,TILs)是存在于間質(zhì)內(nèi)的一類異質(zhì)性細(xì)胞群體,以T細(xì)胞為主。浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞類型、密度和比例等反映了機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn),TILs的數(shù)量和T細(xì)胞亞群與腫瘤的預(yù)后有明顯的關(guān)系,特別是腫瘤局部的免疫平衡,與患者術(shù)后的復(fù)發(fā)和長(zhǎng)期生存等密切相關(guān)。細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)是控制腫瘤生長(zhǎng)的潛在效應(yīng)細(xì)胞。雖然有這類細(xì)胞的存在,但腫瘤仍能生長(zhǎng)提示免疫調(diào)節(jié)失控。具有抑制

3、功能的CD4~+TCD25~+T調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是CD4~+T細(xì)胞的一個(gè)亞群,表達(dá)CD25(IL-2Rα鏈)分子,通過細(xì)胞間接觸或分泌抑制性細(xì)胞因子來抑制CD4~+TCD25~-T細(xì)胞和CD8~+T細(xì)胞的活化和增殖。Foxp3是forkhead/winged-Helix轉(zhuǎn)錄因子家族的一員,目前被認(rèn)為是Treg最具特異性的標(biāo)志,而且Foxp3的表達(dá)在調(diào)節(jié)Treg發(fā)育和功能方面發(fā)揮重要作用。高表達(dá)的Foxp3不僅與不良預(yù)后有關(guān),而且是預(yù)測(cè)總生存

4、和無疾病生存的獨(dú)立預(yù)后因子,但不同類型的腫瘤結(jié)論不一致。研究發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌患者腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞以及瘤內(nèi)Treg數(shù)量明顯增多。在小鼠腫瘤模型研究表明去除Treg細(xì)胞可以引發(fā)抗腫瘤免疫反應(yīng)。目前關(guān)于TILs在食管癌組織中的分布狀況與患者的預(yù)后關(guān)系國(guó)內(nèi)外少見報(bào)道。
　　本研究采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)食管癌組織中CD3~+T、CD8~+T、Foxp3~+Treg、顆粒酶B(granzymeB,GrB)陽性細(xì)胞

5、的數(shù)量及分布情況,并分析它們與預(yù)后的關(guān)系,為食管癌預(yù)后的預(yù)測(cè)及個(gè)體化治療提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的檢測(cè)食管癌間質(zhì)和癌巢中CD3~+T、CD8~+T、Foxp3~+Treg、GrB~+T細(xì)胞的數(shù)量及分布特征,了解它們與食管癌臨床病理特征的關(guān)系,并探討與預(yù)后的關(guān)系。材料與方法1.臨床病理資料:90例食管癌手術(shù)標(biāo)本作為研究對(duì)象。臨床、病理及隨訪資料完整;術(shù)前均未化療、放療。
　　實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果判定:采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(SP法)測(cè)定食管癌

6、組織中CD3、CD8、Foxp3、GrB標(biāo)記的淋巴細(xì)胞的數(shù)量及分布。CD3、CD8在組織中陽性定位于胞膜,Foxp3陽性定位于胞核,三者均以棕黃色、棕褐色表達(dá)為陽性;GrB陽性定位于胞漿,棕黃色陽性顆粒環(huán)繞細(xì)胞核散在分布即為活化的CD8~+T細(xì)胞。按照陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行結(jié)果判定。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:非正態(tài)數(shù)據(jù)采用中位數(shù)和范圍(全距)表示;兩組比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法:Mann-Whitney檢驗(yàn)方法;不同表達(dá)組的差異采用χ~2檢驗(yàn)、生存率差異采用

7、Kaplan-Meier生存分析,并行Log-rank檢驗(yàn);預(yù)后多因素采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型,統(tǒng)計(jì)年齡、分期、組織學(xué)類型、分化程度等因素與生存率相關(guān)狀況。α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1 CD3~+T細(xì)胞呈圓形或橢圓形,大部分聚集在癌巢周邊的間質(zhì),呈灶狀或淋巴濾泡樣分布;少數(shù)細(xì)胞可浸入癌巢,直接與腫瘤細(xì)胞接觸。在間質(zhì)、癌巢中陽性細(xì)胞數(shù)分別為153.2(10.8-369.8)、22.0

8、(0-146.6)個(gè),差異有顯著性(P<0.01)。間質(zhì)內(nèi)CD3~+T細(xì)胞的數(shù)量與腫瘤的浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān),P<0.05。CD3~+T細(xì)胞高表達(dá)組3年生存率較低表達(dá)組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2 CD8~+T細(xì)胞呈圓形或橢圓形,大部分分布在間質(zhì)中,呈灶狀或淋巴濾泡樣分布;少數(shù)細(xì)胞浸入癌巢,直接與腫瘤細(xì)胞接觸。在間質(zhì)、癌巢中陽性細(xì)胞數(shù)分別為44.4(0-172.8)、4.9(0-43.2)個(gè),差異有顯著性(P<0.01)。間質(zhì)內(nèi)

9、CD8~+T細(xì)胞的數(shù)量與腫瘤的浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān),P<0.05。高分化組其表達(dá)高于低分化組,差異有顯著性(P<0.05)。CD8~+T細(xì)胞高表達(dá)組3年生存率較低表達(dá)組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3 Foxp3~+Treg細(xì)胞呈圓形或橢圓形,主要聚集在間質(zhì)內(nèi),呈灶狀分布;少數(shù)細(xì)胞可浸入癌巢,直接與腫瘤細(xì)胞接觸。在間質(zhì)、癌巢中陽性細(xì)胞數(shù)分別為12.5(0-72.4)、2.9(0-19.0)個(gè),差異有顯著性(P<0.01)。間質(zhì)內(nèi)Fo

10、xp3~+Treg細(xì)胞的數(shù)量與病變長(zhǎng)度呈正相關(guān),P<0.05。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組數(shù)量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,差異有顯著性(P<0.05)。Foxp3~+Treg細(xì)胞與預(yù)后呈負(fù)相關(guān),數(shù)量越多,預(yù)后越差(P<0.05)。4 GrB~+T細(xì)胞無密集趨勢(shì),散在分布于癌巢和間質(zhì)。在間質(zhì)、癌巢中陽性細(xì)胞數(shù)分別為12.5(0-38.6)、2.9(0-16.4)個(gè),差異有顯著性(P<0.01)。間質(zhì)內(nèi)GrB~+T的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組數(shù)量低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,差異有

11、顯著性(P<0.05)。GrB~+T細(xì)胞高表達(dá)組較低表達(dá)組具有生存優(yōu)勢(shì),差異無顯著性(P>0.05)。5間質(zhì)內(nèi)浸潤(rùn)的CD3~+T細(xì)胞、CD8~+T細(xì)胞、Foxp3~+Treg細(xì)胞數(shù)量、TNM分期、病變長(zhǎng)度均是影響預(yù)后的獨(dú)立因素,其中浸潤(rùn)的CD3~+T細(xì)胞、CD8~+T細(xì)胞增多是預(yù)后良好的指標(biāo),而是Foxp3~+Treg細(xì)胞增多提示預(yù)后不良。結(jié)論食管癌間質(zhì)中CD3~+T細(xì)胞、CD8~+T細(xì)胞、Foxp3~+Treg細(xì)胞、GrB~+T細(xì)胞數(shù)

12、量明顯多于癌巢。間質(zhì)中浸潤(rùn)的CD3~+T細(xì)胞、CD8~+T細(xì)胞、Foxp3~+Treg、GrB~+T細(xì)胞與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病變長(zhǎng)度、分化程度有關(guān)。腫瘤組織局部CD3~+T、CD8~+T細(xì)胞高表達(dá)組3年生存率高于低表達(dá)組,GrB~+T細(xì)胞高表達(dá)組較低表達(dá)組有生存優(yōu)勢(shì),而Foxp3~+Treg細(xì)胞高表達(dá)組生存率低于低表達(dá)組。間質(zhì)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞數(shù)量可作為判斷預(yù)后的指標(biāo)之一,CD3~+T、CD8~+T細(xì)胞增多預(yù)后良好,Foxp3~+Tre